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RIPA Buffer配制

時間:2021/12/21閱讀:1108
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1.  基礎成分

Tris-HCl(緩沖液成分,防止蛋白變性)

NaCl(鹽份,防止非特異蛋白聚集)

NP-40(非離子去污劑,提取蛋白;用H2O配制成10%儲存液)

去氧膽酸鈉(離子去污劑,提取蛋白;用H2O配制成10%儲存液;避光保存)

注意:準備激酶(致活酶)實驗時,不要加去氧膽酸鈉,因為離子型去污劑能夠使酶變性,導致活性喪失。
 

2.  RIPA蛋白酶抑制劑

苯甲ji 磺酰氟(PMSF)(用異丙醇配制成200 mM的儲存液,室溫保存)

EDTA(鈣螯合劑;用H2O配制成100 mM的儲存液,PH 7.4)

亮抑酶肽(Leupeptin)(用H2O配制成1 mg/ml的儲存液,分裝,-20℃保存) 

抑蛋白酶肽(Aprotinin)(用H2O配制成1 mg/ml的儲存液,分裝,-20℃保存)

胃蛋bai 酶抑制劑(Pepstatin)(用甲醇配制成1 mg/ml的儲存液,分裝,-20℃保存)
 

3.  RIPA磷酸(酯)酶抑制劑

激活的Na3VO4(用H2O配制成200 mM的儲存液

NaF(200 mM的儲存液,室溫保存)

注意:在準備做磷酸(酯)酶實驗的時候,不加磷酸酯酶抑制劑。


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