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凍存細(xì)胞一般過程

時(shí)間:2025/2/24閱讀:295
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凍存細(xì)胞:

1、選對(duì)數(shù)增生期細(xì)胞(證明無支原體污染),在凍存前1d換液。

2、按常規(guī)方法把培養(yǎng)細(xì)胞制備成懸液,計(jì)數(shù),使細(xì)胞密度達(dá)5×10^7/ml左右密度,離心,去上清。

3、加入配制好的凍存液(培養(yǎng)液6.8ml,小牛血清2ml,DMSO 1ml,5.6%NaHCO3 0.1ml),按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。凍存細(xì)胞時(shí)培養(yǎng)液中加入保護(hù)劑10%二甲基亞砜(DMSO) 或甘油,可使冰點(diǎn)降低,使細(xì)胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細(xì)胞外。

4、分裝于無菌凍存管中,每管加1.5m懸液。

5、旋好凍存管并仔細(xì)檢查,一定要蓋緊,做好標(biāo)記。

6、凍存:在特殊的儀器或簡(jiǎn)易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,在30~40min時(shí)間內(nèi),下降到液氮表面,再停30min后,直接投入液氮中。要適當(dāng)掌握下降冷凍速度,過快能影響細(xì)胞內(nèi)水分透出,太慢則促進(jìn)冰晶形成。

操作時(shí)應(yīng)戴防護(hù)眼鏡和手套,以免液氮凍傷。


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