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貨號	A01X1137	規格	1×106
英文名稱	NR8383細胞	產品分類	大鼠細胞系
實驗類型	F12K+15%FBS+1% L-谷an酰胺+1%P/S	報告	（STR鼠源鑒定）報告

公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

名稱	NR8383 [AgC11x3A; NR8383.1] (大鼠肺泡巨噬細胞) (種屬鑒定正確)
別稱	NR-8383; NR 8383; NR8383.1; AgC11x3A; Normal Rat, August 3, 1983
種屬	大鼠
年齡（性別）	不詳
組織來源	肺；巨噬細胞；肺泡
生長特性	半貼半懸
細胞形態	巨噬細胞樣
背景描述	NR8383細胞來源于肺灌洗時的正常大鼠肺泡巨噬細胞，NR8383細胞在Gerbil肺細胞連續培養液存在下培養了8-9個月。隨后，NR8383細胞不再需要外源生長因子。通過有限稀釋法，從單個細胞克隆并亞克隆NR8383細胞，并3次用軟瓊脂亞克隆。NR8383細胞表現出巨噬細胞的特性：吞噬酵母多糖和銅綠、非特異性脂酶活性、Fc受體、氧化降解；分泌IL-1、TNF-β和IL-6，可重復地響應外源生長因子。NR8383細胞響應萊霉素，分泌TNF-β前體。NR8383細胞在萊霉素刺激下，TNF-β mRNA表達也上升。NR8383細胞對內毒素敏感，1-10ng/ml的LPS水平抑制增生達50%。即使達到0.001mg/ml的水平，LPS抑制還是無毒且在后續過程中可逆的。NR8383細胞提供了高響應的肺泡巨噬細胞的均一來源，可以用于體外研究巨響細胞相關活性，此細胞懸浮-貼壁混合生長。
生物安全等級	1
生長培養基	Ham's F-12K＋20% FBS＋1% P/S
推薦傳代比例	1-4×10^5個/mL
推薦換液頻率	2~3次/周
凍存條件	凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮
培養條件	氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃
受體表達情況	Fc
基因表達情況	transforming growth factor beta (TGF beta); interleukin 1 (IL-1); interleukin 6 (IL-6)
保藏機構	ATCC; CRL-2192

細胞傳代：

1. 試驗準備：200ul/1mlTip 頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養皿，離心管。

2. 棄掉培養皿中的培養基，用 1ml 的 PBS 溶液洗滌兩次。

3. 用 Tip 頭加入 1ml Trypsin 液，消化 1 分鐘(37℃，5%CO2 )。用手輕拍培養瓶壁，觀察到細胞從壁上脫落下來為止。

4. 加入 1ml 的含血清培養基終止反應。

5. 用 Tip 頭多次吹吸，使細胞分散開。

6. 將培養液裝入離心管中，1000rpm 離心 5min。

7. 用培養液重懸細胞，細胞計數后選擇 0.8X106 個細胞加入一個 35mm 培養皿。

8. 將合適體積培養液加入離心管中，混勻細胞后輕輕加入培養皿中，使其均勻分布。

9. 將培養皿轉入 CO2培養箱中培養，第二天轉染。

細胞轉染：

1. NR8383大鼠肺泡巨噬細胞轉染試劑的準備

① 將 400ul 去核酸酶水加入管中，震蕩 10 秒鐘，溶解脂狀物。

② 震蕩后將試劑放在－20 攝氏度保存，使用前還需震蕩。

2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質體體積：DNA 質量)來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體積的無血清培養基。加入合適質量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震蕩后在加入合適體積的轉染試劑，再次震蕩。
細胞培養實驗基本操作：
①進無菌室前要洗手，按規定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。
②操作者動作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應在火焰近處并經過燒灼進行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長時間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內的培養液成分如蛋白質等燒焦后會產生有害物質，吸管再用時會將其帶到培養液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細胞培養用品過火焰是也不能時間太長，以免燒焦產生有毒氣體，危害培養細胞，同時塑料細胞培養用品也會產生變形影響使用。
③使用培養液前不宜過早開瓶，開瓶后的培養液應保持斜位，避免直立，以防止下落細菌的污染。不再使用的培養液應立即封閉瓶口，培養的細胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。
④操作時盡量不要談話，咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。
⑤吸取培養液、細胞懸液時，應專管專用，一旦發現吸管口接觸了手和其他污染物品應棄去，以防止污染擴大或造成培養物之間的交叉污染。
⑥操作完畢后應整理好工作臺面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺面；防止細胞交叉污染：所有從別處轉來的或是自己所建的細胞系都要早期留有的充足的凍存儲備，一旦懷疑發生交叉污染，可做細胞遺傳學方面的鑒定，如發現原有的細胞遺傳物發生改變，可以復蘇早期凍存的細胞使用。

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