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elisa定量試劑盒幾種不同的常見測(cè)量方法

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elisa定量試劑盒幾種不同的常見測(cè)量
1、面積內(nèi)標(biāo)法
內(nèi)標(biāo)法是試樣中所有組分不能全部出峰或只要求測(cè)定試樣中某個(gè)或某幾個(gè)組分時(shí),可采用此法。
內(nèi)標(biāo)法是在準(zhǔn)確稱取一定量的試樣中,加入一定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(內(nèi)標(biāo)物),根據(jù)內(nèi)標(biāo)物和試樣的質(zhì)量以及色譜圖上的相應(yīng)峰面積,計(jì)算待測(cè)組分的含量。內(nèi)標(biāo)法的關(guān)鍵是選擇合適的內(nèi)標(biāo)物,內(nèi)標(biāo)物應(yīng)是試樣中不存在的純物質(zhì),物質(zhì)與被測(cè)物質(zhì)相近,能溶于樣品中,但不能于樣品發(fā)生反應(yīng)。此法比較費(fèi)事,一般不使用于快速分析。
2、面積外標(biāo)法
外標(biāo)法是用純物質(zhì)配成一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液(或直接購(gòu)買不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液)分別取一定體積,注入色譜儀,根據(jù)峰面積和濃度做標(biāo)準(zhǔn)曲線。在分析未知樣時(shí)按與標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的操作條件和方法,由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出所需組分的濃度(現(xiàn)在在工作站上直接就能求出濃度)。此法要求進(jìn)樣準(zhǔn)確,操作條件穩(wěn)定,分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)曲線條件必須一致。
3、標(biāo)準(zhǔn)曲線法
取標(biāo)準(zhǔn)被測(cè)成分按依次增加或減少階段法,各自調(diào)制成標(biāo)準(zhǔn)液,注入一定量后,按色譜圖取標(biāo)準(zhǔn)被測(cè)成分的峰面積或峰高為縱座標(biāo),而以標(biāo)準(zhǔn)被測(cè)成分的含量為橫坐標(biāo),制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后按單體中所規(guī)定的方法制備試樣液。取試樣液按制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)相同的條件作出色譜,求出被測(cè)成分的峰面積和峰高,再按標(biāo)準(zhǔn)曲線求出被測(cè)成分的含量。
4、峰面積百分率法
以色譜中所得各種成分的峰面積的總和為100,按各成分的峰面積總和之比,求出各成分的組成比率。根據(jù)色譜上出現(xiàn)的物質(zhì)成分的峰面積或峰高進(jìn)行定量。峰面積可用面積測(cè)定儀測(cè)定,按半寬度法求得(即以峰1/2處的峰寬×峰高求得)。峰高的測(cè)定方法是從峰高的頂點(diǎn)向記錄紙橫座標(biāo)準(zhǔn)垂線,找出此垂線與峰的兩下端聯(lián)結(jié)線的交點(diǎn),即以此交點(diǎn)至峰頂點(diǎn)的距離長(zhǎng)度為峰高。
此外還有氣相色譜儀定量方法還有面積歸一化法,其優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確,當(dāng)操作條件變化時(shí)對(duì)結(jié)果影響較小,宜于分析多組分試樣中各組分的含量。但是試樣中所有組分必須全部出峰,因此,此法在使用中受到一定限制。

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