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人潛伏膜蛋白1(LMP-1)ELISA檢測試劑盒特惠銷售

時間:2017-3-20閱讀:268
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進口原裝elisa試劑盒用途: 用于人血清、血漿及相關液體樣本中潛伏膜蛋白1(LMP-1)的測定。
人潛伏膜蛋白1(LMP-1)ELISA檢測試劑盒檢測原理
本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)測定樣品中人潛伏膜蛋白1(LMP-1)的水平。向預先包被了人潛伏膜蛋白1(LMP-1)單克隆抗體的酶標孔中加入潛伏膜蛋白1(LMP-1),溫育;溫育后,加入生物素標記的潛伏膜蛋白1(LMP-1)抗體,再與鏈霉親和素-HRP結合,形成免疫復合物,再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶,然后加入底物A、B,產生藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺與樣品中人潛伏膜蛋白1(LMP-1)的濃度呈正相關。
注意事項
從2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
為避免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。
6.   所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按生物廢棄物處理。終止液為2M硫酸,使用時必須注意安全。
7.  各步驟加樣均應使用加樣器,并經常校準其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
8.  每次試驗測定的同時做標準曲線,。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔高濃度的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請后乘以總稀釋倍數(×n)。
9.  配制試劑時,要用旋渦混合儀混勻。加入孔內的試劑,充分混勻對測試結果尤為重要,使用微量振蕩器(使用低頻率),如無微量振蕩器,可在反應前手工輕輕晃動酶標板1分鐘,例如做圓周動作,使加入孔中的反應液混勻。
10.  實驗用酶標儀應嚴格按使用說明書規范操作,并在使用前充分預熱。
11.  手工洗板應注意:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
樣本要求
1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存或根據存放,時間做相應溫度調整,但應避免反復凍融,(由于樣本種類過多,每個單位處理方式不一樣,本說明書不做詳細介紹)。
人潛伏膜蛋白1(LMP-1)ELISA檢測試劑盒操作程序
標準品的稀釋:(本試劑系統提供原倍標準品一支,用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋)按下表格執行:
 500ug/ml
(5號標準品)
120μl的原倍標準品加入120μl的標準品稀釋液
 250ug/ml
(4號標準品)
120μl的5號標準品加入120μl的標準品稀釋液
   125ug/ml
(3號標準品)
120μl的4號標準品加入120μl的標準品稀釋液
  62.5ug/ml
(2號標準品)
120μl的3號標準品加入120μl的標準品稀釋液
  31.2ug/ml
(1號標準品)
120μl的2號標準品加入120μl的標準品稀釋液
進口原裝elisa試劑盒根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
加樣:1)空白孔:(空白對照孔不加樣品,生物素標記的抗潛伏膜蛋白1(LMP-1)抗體,鏈霉親和素-HRP,其余各步操作相同 ;2)標準品孔:加入標準品50μl,鏈霉親和素-HRP50μl(標準品中已事先整合好生物素標記抗體,故在操作時不加,只加鏈霉素-HRP);3)樣本反應孔:加入樣本40μl,然后各加入抗潛伏膜蛋白1(LMP-1)抗體10μl、鏈霉親和素-HRP(空白孔除外)50μl。蓋上封板膜,輕輕振蕩混勻,37℃溫育60分鐘。
配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋備用。
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘。
終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后10分鐘以內進行。
結果判斷
1. 每個標準品和標本的OD值應減去零孔的OD值。(若不減零孔值,標準曲線的零孔應相交于Y軸)
2. 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種熟悉應用軟件來計算。
3.手工繪制標準曲線。以標準品濃度作橫坐標,OD值作縱坐標,以平滑線連接各標準品的坐標點。通過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度。推薦使用專業制作曲線軟件進行分析計算結果。
4.若標本OD值高于標準曲線上限,應適當稀釋后重測,計算濃度時應乘以稀釋倍數。
操作總結
準備試劑,樣品和標準品
加入準備好的樣品和標準品,生物素標記二抗和酶標試劑,37℃反應60分鐘。
洗板5次,加入顯色液A、B,37℃顯色10分鐘
 加入TMB終止液
10分鐘內酶標儀測OD值
 計算待測樣本因子含量
人潛伏膜蛋白1(LMP-1)ELISA檢測試劑盒試劑盒性能
準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值,大于等于0.9200。
靈敏度:小可檢測濃度達,1.95ug/ml。
特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
重復性:板內、板間變異系數均小于15%。
5 . 回收率:70-110%.
6. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
7. 有效期:6個月
8. 進口原裝elisa試劑盒檢測范圍: 950ug/ml -7.8ug/ml

 

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