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ATCC細胞在體外培養中所需的條件

時間:2017/5/16閱讀:393
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1、ATCC細胞無污染環境

培養環境無毒和無菌是保證細胞生存的首要條件。當細胞放置于體外培養時,與體內相比細胞丟失了對微生物和有毒物的防御能力,一旦被污染或自身代謝物質積累等,可導致細胞死亡。因此在進行培養中,保持細胞生存環境無污染、代謝物及時清除等,是維持細胞生存的基本條件。

2、恒定的溫度

維持培養細胞旺盛生長,必須有恒定適宜的溫度。人體細胞培養的標準溫度為36.5℃±0.5℃,偏離這一溫度范圍,細胞的正常代謝會受到影響,甚至死亡。培養細胞對低溫的耐受力較對高溫強,溫度上升不超過39℃時,細胞代謝與溫度成正比;人體細胞在39-40℃1小時,即能受到一定損傷,但仍有可能恢復;在40-41℃1小時,細胞會普遍受到損傷,僅小半數有可能恢復;41-42℃1小時,細胞受到嚴重損傷,大部分細胞死亡,個別細胞仍有恢復可能;當溫度在43℃以上1小時,細胞全部死亡。

3、氣體環境

氣體是人體細胞培養生存必需條件之一,所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環,產生供給細胞生長增殖的能量和合成細胞生長所需用的各種成分。開放培養時一般把細胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環境中。

二氧化碳既是ATCC細胞代謝產物,也是細胞生長繁殖所需成分,它在細胞培養中的主要作用在于維持培養基的PH值。大多數細胞的適宜PH為7.2-7.4,偏離這一范圍對細胞培養將產生有害的影響。但細胞耐酸性比耐堿性大一些,在偏酸環境中更利于細胞生長。有資料顯示,原代羊水細胞培養PH6.8時Z適。

 

4、細胞培養基

培養是既是培養細胞中供給細胞營養和促使細胞增殖的基礎物質,也是培養細胞生長和繁殖的生存環境。培養基的種類很多,按其物質狀態分為半固體培養基和液體培養基兩類;按其來源分為合成培養基和天然培養基。

(1)合成培養基:合成培養基是根據細胞所需物質的種類和數量嚴格配制而成的。內含碳水化合物、氨基酸、脂類、無機鹽、維生素、微量無素和細胞生長因子等。單獨使用細胞雖有生存但不能很好的生長增殖。

(2)天然培養基:使用Z普遍的天然培養基是血清,基本以小牛血清Z普遍。血清由于含有多種細胞生長因子、促粘附因子及其多種活性物質。與合成培養基合用,能使ATCC細胞順利增殖生長。常見使用Z為5-20%。

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