ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)原理

1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定(enzyme linked immunosorbent 

assay，ELISA)用于IgG定量測(cè)定的文章，使得1966年開(kāi)始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成

液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測(cè)定方法。

大鼠ELISA試劑盒的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗

體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定

時(shí)，受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使

固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也

通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入

酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故

可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

由于酶的催化頻率很高，故可極大地地放大反應(yīng)效果，從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度

如何正確使用酶結(jié)合物?

1.酶結(jié)合物的稀釋液

在稀釋液中常加入高濃度的無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)(例如1%BSA或5%脫脂奶粉)，通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)抑制酶結(jié)合物在

固相載體上的非特異性吸附。一般還加入能夠抑制蛋白質(zhì)吸附于塑料表面的非離子型表面活性

劑，如吐溫20(0.05%的濃度較為適宜)。

2.正確稀釋酶結(jié)合物

酶結(jié)合物的合適工作濃度需要通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定，濃度過(guò)高易導(dǎo)致本底偏高，濃度過(guò)低則會(huì)導(dǎo)

致陽(yáng)性信號(hào)的減弱。

酶結(jié)合物在使用前稀釋，稀釋后的酶結(jié)合物不宜長(zhǎng)期保存，因?yàn)榈蜐舛鹊拿附Y(jié)合物極易失

活。