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規格 | 50次 | 貨號 | YS-P013500 |
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品牌 | YSRIBIO |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
服務流程:
公司產品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數據分析——結果交付——售后服務。
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
剛果嗜皮菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 50次 | YS-P013500 |
PCR反應鑒定——PCR反應條件:
循環步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區,其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活PCR技術概論。
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
豬粘蛋白17(MUC17)抑霉唑標準溶液(10μg/ml,u=2%)FAM129B蛋白抗體
豬外信號調節激酶3(ERK3)吡蟲啉標準溶液(1mg/ml,溶劑:)微管動力調節蛋白2抗體
豬尿激酶型纖溶酶原激活因子(PLAU/uPA)稻瘟靈標準溶液(10μg/ml,u=2%)FAM50A蛋白抗體
豬血管性血友病因子(VWF)霜靈標準溶液(100μg/ml,u=5%)FAM113A蛋白抗體
豬絨毛膜促性腺激素α肽(CGα)標準溶液(100μg/ml,u=5~3%,酮)FAM150A蛋白抗體
豬神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)殺螟硫磷(標準品)FRMD8蛋白抗體
豬成纖維生長因子7(FGF7/KGF)鄰二酸二酯(標準品)FGFR1癌因伴侶蛋白抗體
豬粘蛋白13(MUC13)對二氯(分析標準品,>99.8%(GC))FAM家族蛋白40A抗體
豬氨端前腦鈉素(NT-proBNP)對二氯標準溶液(0.102mg/ml,體:異辛烷)FAM55D蛋白抗體
豬瘦素(LEP)1,4-二氯-d4(98% D, 98% (CP))組織激活過氧化酶活化增生受體γ蛋白抗體
豬血小板相關補體3(PAC3) 間二氯(標準品)FAM21C蛋白抗體
豬前列腺特異性抗原(PSA/KLK3)二溴氯烷(標準品)FAM13C1蛋白抗體
豬半乳凝集素1(GAL1)2,4-二硝氯標準溶液(1000μg/ml,溶劑:)FAM59B蛋白抗體
豬VI型膠原(COL6) 死蜱標準溶液(100μg/ml,u=6~4%,酮)FAM59A蛋白抗體
豬性T淋巴相關抗原4(CTLA4) 矮壯素(標準品)FAM160B1蛋白抗體
豬酸諾龍/酸去睪酮(NP)菌靈(標準品)FAM161B蛋白抗體
剛果嗜皮菌染料法熒光定量PCR試劑盒PACAP R1/VIP receptor-I 腺苷酸環化酶激活肽受體-I抗體鹽酸吡哆 99%
PACAP-27/38 腺苷酸環化酶激活肽-27/38抗體1,4-哌二磺酸二鈉鹽 BC
PACAP-38 腺苷酸環化酶激活肽-38抗體1,4-哌二磺酸倍半鈉鹽 99%
PADI4 關節炎相關因抗體并五 98%
PAF 血小板活化因子抗體 對磷酸二鈉 六水合物 培養級, ≥98%
PALB2 癌易感因相關蛋白2對磷酸二鈉 for enzyme immunoassay,≥99.0%
PAFAH2/Lp-PLA2 脂蛋白磷脂酶A2抗體鈉 AR,98.0%
PAFR/PTAFR 血小板活化因子受體抗體磺二氧嘧啶 98%
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