（1）進(jìn)口elisa試劑盒待測(cè)樣品孔中每孔參加待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，參加純細(xì)胞裂解液100μl。
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過(guò)夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反響液，用洗刷液過(guò)洗一遍（將洗刷液注滿板孔后，即甩去），以后將洗刷液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖擺。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗刷3-4次。
（4）陰性對(duì)照孔每孔參加PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔參加1：500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
（5）進(jìn)口elisa試劑盒酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
（6）洗板，同（4）。
（7）每孔加1：5000稀釋的HRP-符號(hào)的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
（9）洗板，同（4）。
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，ELISA試劑盒悄悄混勻10s，置37℃暗處反響15-20min。
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4停止反響。
（12）別離測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終究測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等形成的光攪擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，核算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性斷定規(guī)范進(jìn)口elisa試劑盒。
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