1975年Kohler和Milstein發(fā)現(xiàn)將小鼠骨髓瘤細(xì)胞與和綿羊紅細(xì)胞免疫的小鼠脾細(xì)胞進(jìn)行融合，形成的雜交瘤細(xì)胞既可產(chǎn)生抗體，又可無(wú)性繁殖，從而創(chuàng)立了單克隆抗體雜交瘤技術(shù)。這一技術(shù)上的突破使血清學(xué)的研究進(jìn)入了一個(gè)高度的新紀(jì)元。

　　免疫細(xì)胞化學(xué)的 技術(shù)關(guān)鍵之一是制備特異性強(qiáng)、親合力大、滴度高的特異性抗體，由于每種抗原都有幾個(gè)抗原決定簇，用它免疫動(dòng)物將產(chǎn)生對(duì)各個(gè)決定簇的抗體，即多克隆抗體。單克隆抗體則是由一個(gè)產(chǎn)生抗體的細(xì)胞與一個(gè)髓瘤細(xì)胞融合而形成的雜交廇細(xì)胞經(jīng)無(wú)性繁殖而來(lái)的細(xì)胞群所產(chǎn)生的，所以它的免疫球蛋白屬同一類型，質(zhì)地純一，而且它是針對(duì)某一抗原決定簇的，因此特異性強(qiáng)，親合性也一致。單克隆抗體（McAb）的特性和常規(guī)血清抗體的特性比較見(jiàn)2-3。

表2—3 單克隆抗體（McAb）和常規(guī)免疫血清抗體的特性比較

項(xiàng)目

常規(guī)免疫血清抗體

McAb

抗體產(chǎn)生細(xì)胞

多克隆性

單克隆性

抗體的結(jié)合力

特異性識(shí)別多種抗原決定簇

特異性識(shí)別單一抗原決定簇

免疫球蛋白類別及亞類

不均一性，質(zhì)地混雜

同一類屬，質(zhì)地純一

特異性與親合力

批與批之間不同

特異性高，抗體均一

有效抗體含量

0.01～0.1mg/ml（小鼠腹水）

0.5～5.0mg/ml(小鼠腹水) 
0.5～10.0μg/ml（培養(yǎng)物上清液）

用于常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)

可用

單抗組合應(yīng)用

抗原抗體形成格子結(jié)構(gòu)（沉淀反應(yīng)）

容易形成

一般難形成

抗原抗體反應(yīng)

抗體混雜，形成2分子反應(yīng)困難，不可逆

可形成2分子反應(yīng)，可逆

　　單克隆抗體的制備方法如下。

　　（一）動(dòng)物的選擇與免疫

　　1．動(dòng)物的選擇 　純種BALB/C小鼠，較溫順，離窩的活動(dòng)范圍小，體弱，食量及排污較小，一般環(huán)境潔凈的實(shí)驗(yàn)室均能飼養(yǎng)成活。目前開(kāi)展雜交瘤技術(shù)的實(shí)驗(yàn)室多選用純種BALA/C小鼠。

　　2．免疫方案 　　選擇合適的免疫方案對(duì)于細(xì)胞融合雜交的成功，獲得高質(zhì)量的McAb至關(guān)重要。一般在融合前兩個(gè)月左右根據(jù)確立免疫方案開(kāi)始初次免疫，免疫方案應(yīng)根據(jù)抗原的特性不同而定。

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