人elisa定量檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)是不是也遇到過這些問題?
蛋白質(zhì)印跡法（免疫印跡試驗(yàn)）即Western Blot。它是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實(shí)驗(yàn)方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細(xì)胞或生物組織樣品進(jìn)行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達(dá)情況的信息。WB實(shí)驗(yàn)作為科研研究中實(shí)驗(yàn)其中一種方法，卻蘊(yùn)含了很多知識，可謂是小實(shí)驗(yàn)里卻有大文章。針對WB實(shí)驗(yàn)經(jīng)常遇到的一些問題，上海滬鼎生物技術(shù)專員總結(jié)出了應(yīng)對的一系列“5點(diǎn)”注意事前及建議，希望能幫助到您！
實(shí)驗(yàn)的5點(diǎn)注意事項(xiàng)：
1.陽性對照對裂解物用來表明實(shí)驗(yàn)室有效并且是正確的，及可證明目標(biāo)蛋白不在樣本表達(dá)。
2.跑在樣品旁邊的分子量標(biāo)準(zhǔn)能測定蛋白分子量的大小并且能監(jiān)測電泳的進(jìn)展。
3.避免手指直接接觸膜，應(yīng)使用鑷子，手指上的油脂與蛋白會封閉轉(zhuǎn)膜效率并易產(chǎn)生背景污斑。
4.確認(rèn)裁剪的膜和濾紙與凝膠尺寸相同，邊緣太大會導(dǎo)致在進(jìn)行轉(zhuǎn)膜時電流不能通過膜。
5.過度曝光的膠片不適合用于分析，因?yàn)椴荒芘卸ㄏ鄬Φ鞍琢俊?br />解決無信號的5點(diǎn)建議：
1.二抗需和一抗宿主的物種相同（如一抗來自兔，二抗為抗兔抗體）。原因： 一抗和二抗不匹配。
2.參照說明書，設(shè)置陽性對照。原因：一抗不識別檢測物種蛋白。
3.每泳道蛋白上樣量不低于20~30μg，設(shè)置陽性對照。原因：抗原量不足。
4.使用可逆染色劑如麗春紅S檢測轉(zhuǎn)膜效果，檢測轉(zhuǎn)膜操作是否正確。PVDF膜預(yù)先浸在甲醇中。原因：轉(zhuǎn)膜不充分。
5. 使用含0.5%脫脂奶粉或更換封閉劑，減少封閉時間。原因：過度封閉使目標(biāo)蛋白不能顯色。
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