近日有客戶ELISA試劑盒價格間接法中，如何提高陽性值，在抗原濃度不變的情況下？他用自己的抗原包被的板子，用自己的酶標二抗和顯色液做，陽性值很低，為OD 0.5。但是試劑盒中的酶標二抗和顯色液做，陽性值卻很高OD 1.4，這樣看來我的抗原應該沒問題，好像問題出在酶標二抗上，請勁馬技術幫忙分析。根據客戶留言在網上問題解答如下：

     先要確定兩種酶標二抗使用的是不是同一批包被的板，因為雖然是相同的抗原，可能兩次包被不一樣。

    如果是同一批板，出現這種情況只能說明你的酶標二抗失活了，買新的二抗，按說明書上的稀釋倍數稀釋；陰性對照有顏色很可能是沒封閉好。陽性值是由你的抗原抗體間親和力決定的，增加抗原抗體用量，或提高二抗濃度，但靈敏度可能會降低，你可以重新摸下工作濃度；

    陰性值降低，你可以采用BSA封閉2小時看看，好像沒聽說有人用FCS封閉的，你可以嘗試采用其他的封閉液，據我了解，用BSA封閉不是很好，可以試試脫脂奶粉；再就是TMB本身時間長了就會略顯色，你可以調整顯色時間。