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抗體的保存需要注意要點(diǎn)

來(lái)源:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司   2021年10月26日 13:41  

抗體純化后,一般將其緩沖液置換成PBS,便于后期標(biāo)記或其他用途使用,如果濃度太低,需要濃縮,抗體濃縮后濃度最好不要太高,太高容易引起沉淀。

透析濃縮方法:

1.透析袋濃縮

將純化的抗體裝入透析袋中,透析袋表面覆滿(mǎn)PEG20,000進(jìn)行濃縮(不要用蔗糖濃縮)。

2.超濾管濃縮

將純化的抗體轉(zhuǎn)入15 ml的超濾管,3,500rpm離心12min左右(根據(jù)要濃縮的體積摸索離心時(shí)間)。

3.抗體濃度測(cè)定

取適量抗體檢測(cè)OD280nm的吸光度,讀數(shù)不要超過(guò)2。如果讀數(shù)超過(guò)2,再稀釋?zhuān)梦舛茸x數(shù)除以1.35,再乘以稀釋倍數(shù)即為抗體的大致濃度(mg/ml)。抗體的濃度(mg/ml)也可以用(OD280nm-0.35×OD495nm)/1.4這個(gè)公式計(jì)算。

抗體的保存:

抗體的保存需要注意以下幾個(gè)方面:

1.純化完的抗體推薦于PBS或者TBS溶液保存,可添加0.1%疊氮化 Na防腐劑,但是疊氮化Na可能對(duì)下游實(shí)驗(yàn)中的辣根過(guò)氧化物酶產(chǎn)生抑制作用,作為免疫檢測(cè)試劑開(kāi)發(fā)的抗體一般使用有機(jī)化合物高分子防腐劑,避免對(duì)下游酶或者熒光染料的影響,如有需要可聯(lián)系福因德生物。

2.分裝成小管,避免污染或者反復(fù)凍融,溶解時(shí)需要緩慢解凍,不可直接放熱水急速解凍。

3.存放抗體容器不要選擇聚苯乙烯材料,可以選擇玻璃或者對(duì)蛋白低吸附材料的管子。

4.如果抗體要進(jìn)行后期標(biāo)記,最好在PBS中保存,不加防腐劑,短期內(nèi)使用可放4,長(zhǎng)期存放-20保存。

5.如果抗體只做免疫學(xué)實(shí)驗(yàn),不進(jìn)行標(biāo)記可以添加保護(hù)劑(1% BSA或海藻糖),還可以加30%~50%甘油,-20保存,此保存方法只適合下游直接使用(ELISA,IHC,WB),不適合對(duì)其進(jìn)行標(biāo)記開(kāi)發(fā),但其在-20不結(jié)冰,對(duì)抗體效價(jià)保存較好,并且使用時(shí)也不用反復(fù)凍融。

6.凍干可以保存更長(zhǎng)時(shí)間,但是同樣要加入很多輔料保護(hù)劑,如:海藻糖、BSA,加了保護(hù)劑后期開(kāi)發(fā)較難;也可以直接不加輔料保護(hù),直接凍干,但效價(jià)損失大。

7.不管用何種方法保存,應(yīng)盡量分裝成小管便于以后使用,抗體管上明確記錄必要信息(名稱(chēng)、編號(hào)、時(shí)間,效價(jià)、純化人等)并且要建立記錄文檔記錄更詳細(xì)的信息。


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