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大鼠肺內的組織分析(其林貝爾渦旋儀使用)

來源:上海蟻霖科學儀器有限公司   2021年11月08日 17:04  

慢性阻塞性肺病( chronic obstructive pulmonary disease,COPD) 是一種以氣流受限為主要特征的慢性肺部疾病。最初表現為用力時的呼吸困難。隨著病情加重,患者會在休息時也感到呼吸困難,嚴重時會威脅至患者生命。據報道,2015 年約有1. 75 億成年人患有 COPD,其中每年約有 320 萬人死于 COPD,是致死率排名第四的疾病。隨著環境污染的加劇和吸煙人口的增加,COPD 的患者數量仍在快速增長,預計至 2030 年,致死率將上升至第三位。


1 儀器與材料

高效液相色譜系統: 5410 紫外吸收檢測器、5310 色譜柱恒溫箱、5210 自動進樣器、5220 泵( 日立( 中國) 有限公司) ,Thermo BDS HYPERSIL C18色譜柱( 250 mm × 4. 6 mm,5 μm,賽默飛世爾( 中國) 科技有限公司) ,FRITSCH6 型行星式球磨機( 德國 Fritsch 公司) ,Büchi B 290 型Mini 噴霧干燥儀( 瑞士 Büchi 實驗技術有限公司) ,FRESCO21 型冷凍離心機( 賽默飛世爾( 中國) 科技有限公司) ,渦旋儀( 海門市其林貝爾儀器制 造 有 限 公 司) ,MicroSprayer AerosolizerModel IA-1C、Dry Powder InsufflatorTM -Model DP4、Model LS-2-R( 美國 Penn-Century 公司) 。布*( budesonide,BUD,湖北葛店人福藥業有限責任公司) ,普朗尼克( F68,巴斯夫中國有限公司) ,透明質酸鈉( sodium hyaluronic,HA,含量質量分數≥ 96. 8,重均分子質量為 1470 ku,數均分子質量為 703 ku,山東福瑞達生物醫藥有限公司) ,篩分乳糖( Respitose SV003,荷蘭 DFEPharma 公司) ,布*粉吸入劑( pulmicort turbuhaler,瑞典 Astra Zeneca 公司) ,醋酸*( 武漢東康源科技有限公司) ,注射用生理鹽水( 色譜純,吉林省都邦藥業股份有限公司) ,烏拉坦( 分析純,天津市凱信化學公司) ,甲醇( 色譜純,天津市康科德科技有限公司) ,冰醋酸( 分析純,天津市富宇精細化工有限公司) ,乙酸乙酯( 色譜純,山東禹王和天下新材料有限公司) 。健康 SD 大鼠 15 只,雄性,體質量為 180 ~220 g,沈陽藥科大學動物實驗中心,質量合格證號: 211002300029072,使用許可證號: SYXK( 遼)。 


2 方法 

2. 1 色譜條件 

色譜柱: Thermo BDS HYPERSIL C18 ( 250 mm ×4. 6 mm,5 μm) ,流動相: 甲醇 pH 3. 2 的醋酸水溶液( 體積比為 72∶ 28) ,流速: 1. 0 mL·min - 1,檢測波長: 254 nm,柱溫: 40 °C,進樣量: 20 μL,內標: 醋酸*。 


2. 2 溶液的配制 

2. 2. 1 布*儲備溶液 

取布*對照品約 25. 0 mg,精密稱定,置于 50 mL 量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,得質量濃度為 500 mg·L - 1的布*儲備溶液。 


2. 2. 2 布*系列標準溶液 

分 別 精 密 量 取 2. 00、1. 00、0. 40、0. 20、0. 10 mL布*儲備溶液,置于 100 mL 量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,得質量濃度分別為10. 0、5. 0、2. 0、1. 0、0. 5 mg·L - 1的布*系列標準 溶 液。精 密 量 取 1. 00 mL 質 量 濃 度 為2. 0 mg·L - 1的標準溶液,置于 10 mL 量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,即得質量濃度為 0. 2 mg·L - 1的標準溶液。 


2. 2. 3 內標溶液 

取醋酸*標準品約 10. 0 mg,精密稱定,置于 50 mL 量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,得質量濃度為 200 mg·L - 1的醋酸* 儲 備 溶 液。精 密 量 取 1. 00 mL 醋 酸 曲 安奈德儲備溶液,置于 50 mL 量瓶中,加甲醇稀釋至 刻 度,搖 勻,即 得 內 標 溶 液 ( 質 量 濃 度 為4. 0 mg·L - 1) 。 


2. 3 肺組織樣品的處理 

大鼠處死后迅速解剖,在氣管環節處將其剪斷,取出帶有完整氣管的肺組織( 此過程在5 min內完成) ,生理鹽水洗去表面的,濾紙擦干,將肺葉鋪展于干燥的表面皿內,用鈍器輕輕地對肺葉進行密集的橫切操作,然后將肺泡從細支氣管慢慢刮下( 細支氣管有韌性,不易被切斷或刮斷) ,最后用分別將細支氣管、支氣管和氣管剪開,分離成氣管、支氣管、左細支氣管、右細支氣管、左肺泡、右肺泡6 個部分,于 - 20 °C 下冷凍保存,待處理。


3 討論 

布*是一種具有局部抗炎作用的糖皮質激素。用于 COPD 治療時,其主要的作用部位為末端細支氣管。因此,吸入的布*制劑最理想的狀態是能夠較多地沉積在末端細支氣管,利于其進一步的發揮療效。本文作者將肺部組織分離成氣管、支氣管、左右細支氣管、左右肺泡等6 個部分,考察了 3 種處方的布*經氣管內給藥后在肺組織的分布。結果顯示,BUD-NEM在細支氣管分布最多,BUD-NC 次之,而 BUD-PT主要沉積在氣管、支氣管部位,在細支氣管分布最少。這可能是因為與市售藥相比,BUD-NEM 的空氣動力學粒徑相對較小,大部分粒子能夠到達氣道深處,將更多的布*遞送至靶部位,同時,其黏附性可增加布*在靶部位的滯留時間,使其更好的發揮局部藥效。




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