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微量振蕩器使用于蘆薈凝膠的曬后修復功效分析

來源:上海蟻霖科學儀器有限公司   2021年11月08日 19:09  

蘆薈是一種多年生百合科蘆薈屬肉質的草本 植物,起源于南非,作為天然藥用植物,蘆薈 已有幾千年的藥用歷史,在我國古代醫(yī)書《神農本 草經》、《本草綱目》、《本草拾遺》中均記載著蘆薈 特殊的藥用功效,在《辭海》中也有相關記載: “蘆薈,主產于熱帶非洲,中國云南元江有野生”。 在日本,人們把蘆薈稱之為“不需要大夫”(醫(yī)者いらず),被譽為世界標準藥典的《英國藥典》對 其也有入藥記載 。



1 材料和方法

1.1 主要試劑和儀器

1.1.1 樣品和試劑


庫拉索蘆薈凝膠凍干粉(批號 ,云南萬綠生物股份有限公司)、*、透明質 酸鈉(Bomei,相對分子質量在 0.8 × 106 ~ 2.0 × 106 )、透明質酸酶(上海源葉生物科技有限公司, 300 ~ 500 U/mg)、醋酸鈉(NaC2H3O3•3H2O)、角質 形成細胞培養(yǎng)液(第四軍醫(yī)大學組織工程中心)、 PBS(博士德)、MTT(Sigma)、 DMSO(Sigma)、 Human IL - 1α ELISA KIT(博士德)、Human IL - 8 ELISA KIT(Abcam)。冰醋酸、氯化鈉、十六烷基 基*(CTAB),均為國產分析純。



1.1.2 儀器

紫外 - 可見分光光度計(Thermo)、CO2 培養(yǎng) 箱(Thermo)、超凈工作臺(蘇凈安泰)、倒置顯微 鏡(Olympus)、微量振蕩器(其林貝爾)、酶標儀 (BioTek)、恒溫箱(泰斯特)。

1.1.3 測試系統(tǒng)

 

細胞實驗所用細胞為角質形成細胞,由廣東 博溪生物科技有限公司通過細胞原代、傳代培養(yǎng)獲得。


1.2 實驗方法

1.2.1 透明質酸酶抑制實驗


透明質酸酶能將大分子的透明質酸水解成低 分子化合物,未水解的透明質酸會與十六烷基 基*(CTAB)形成不溶物,而水解后的低分子 化合物不會。通過測定 405 nm 處的濁度值,可以 反映透明質酸酶的活性。 實驗設置:將庫拉索蘆薈凝膠粉按照 16.5、 33、82.5 和 165 mg/mL 的質量濃度進行分組,每 個實驗分組按表 1 進行操作。



1.2.2 基于角質形成細胞的 MTT 檢測實驗


實驗方案:庫拉索蘆薈凝膠粉樣品檢測設置 8 個濃度梯度,每個濃度梯度下設置 3 個重復孔,同 時,實驗設置溶劑對照孔、調零孔(角質形成細胞 培養(yǎng)液)和陽性對照孔(PC, 40 mg/mL DMSO)。 通過 MTT 細胞活性檢測方法,篩選下一步實驗中 細胞給藥的安全濃度。



2 結果

數據經過 SPSS 12.0 統(tǒng)計軟件做多組間單因 素方差分析,以 P<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義,由 于測試平臺特性,數據存在波動性,SD 值控制在 10% 以內。通過測試,庫拉索蘆薈凝膠粉在 16.5 ~ 165 mg/mL 范圍內對透明質酸酶抑制率分別為 13.10% ~ 82.14%(P<0.05),低濃度下比對照品甘 草酸二鉀效果稍弱,但在 165 mg/mL 的高濃度下, 可以達到與 0.5 mg/mL *接近的效果,本 次測試的結果表明,庫拉索蘆薈凝膠粉測試樣具有 較好的透明質酸酶活性抑制作用,且在一定濃度范 圍內,抑制率與添加量呈正相關,與 0.5 mg/mL 甘 草酸二鉀的抑制趨勢和效果接近。根據 MTT 實驗結果可以看出:與溶劑對照相 比,當蘆薈凝膠粉濃度為 250 mg/L 時,細胞的相 對活力值為 91.40%,且無細胞毒性(注:選取細胞 相對活力值大于 90% 的轉折點濃度作為安全 給藥濃度)。根據形態(tài)學結果可以看出:樣品庫拉索蘆薈凝 膠粉質量濃度為 250 mg/L 時,細胞邊緣輪廓清晰, 形態(tài)規(guī)則,胞內無明顯顆粒物,與溶劑對照組細胞 狀態(tài)無明顯差異。故根據 MTT 結果和形態(tài)學結 果,最終確定樣品庫拉索蘆薈凝膠粉在角質形成細 胞上的安全給藥濃度為 250 mg/L。



3 討論

蘆薈作為一種具有漫長種植史的草本植物,在 很多地方被當地人用于保濕和修復方面的藥材,而 對于蘆薈含有的成分修復作用的研究也很多, 但大多是基于蘆薈大黃素等蒽醌類物質的功效研 究,對蘆薈凝膠的修復功效研究還較少。 透明質酸酶是一類在動物組織和微生物中廣 泛存在的酶,它通過斷開透明質酸(HA)糖鏈中的 N - 乙酰氨基葡糖和 D - 葡糖醛酸之間的糖苷鍵, 將其解聚和水解成小分子的 HA 或寡糖,HA 的代 謝對于皮膚的保濕、微觀炎癥和損傷的修復都有著 重要的作用,透明質酸酶調節(jié) HA 代謝的作用在生 理活動中也越來越受到重視,活性成分對透明 質酸酶的抑制,與其保濕、曬后修復等功效都有著 重要的關聯(lián)。 紫外線損傷,又稱光老化,是由于皮膚在紫外線,特別是 UVB 的照射下,局部出現的紅斑、角質 層破壞等微觀損傷,也是皮膚眾多微觀炎癥和損傷 中較為常見的微觀損傷。







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