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如前所述,影響紫外可見分光光度計定量分析誤差的因素很多,例如,雜散光、噪聲、基線平直度等,同樣,光譜帶寬( Spectra Band Width,SBW)也是影響紫外可見分光光度計定量分析誤差的主要因素之一。Owen在研究光譜帶寬對分析誤差的影響后,他指出紫外可見分光光度計的光譜帶寬非常重要。紫外可見分光光度計的光譜帶寬(SBW)/自然帶寬(NBW)≤O.1時(自然帶寬即試樣吸收帶的半高度的寬度),該儀器可滿足99%的試樣的分析,并且分析準確度可達99. 5%。
紫外可見分光光度計的定量分析理論基礎是比耳定律。比耳定律可描述為:當一束平行單色光通過某一均勻的有色溶液時,該溶液的吸光度與溶液的濃度和液層厚度(光程)的乘積成正比。
從理論上講,比耳定律只適用于單色光,但在實際的吸收光譜儀器中,可能從光譜儀器的單色器上得到真正的單色光,只能得到波長范圍很窄的光譜帶。因此,進入被測樣品的光仍然是在一定波段范圍內(nèi)的復合光。由于物質(zhì)對不同波長的光具有不同的吸光度,因此,在實際工作中即使用很高級的吸收光譜分光光度計、采用很小的光譜帶寬,仍然會產(chǎn)生比耳定律的偏離(即產(chǎn)生吸光度測量誤差)。
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