(一) 光度準確度的測試材料
   美國NBS 規(guī)定測試材料可以是固體標準濾光片, 如930、203 標準片等,也可以是化合物標準溶液, 如鉻酸鉀、重鉻酸鉀溶液等, 用戶可以任意選擇。我國的國家標準也與NBS 相類似。各個國家的標準中, 都各自講明了固體和液體兩者的優(yōu)缺點。作者認為固體標準濾光片比標準溶液好, 理由如下:
    ① 固體標準濾光片操作簡單, 攜帶方便。
    ② 固體標準濾光片可以用空氣作參照, 避免了尋找理想?yún)⒄掌穆闊?br>    ③ 固體標準濾光片可以得到多個所需要的、較理想的峰或谷。如安徽省計量測試研究所研制的BW2018 標準片, 可以有兩個峰一個谷, 且分布均勻(270 nm、293nm、350 nm)。
    ④ 固體標準濾光片的標準片基本身可以吸收一部分雜散光, 在吸收( 或透射) 峰的強度很小( 或很大) 時, 可以提高光度準確度的測量準確度。

(二) 光度準確度與光譜帶寬的關(guān)系
    光譜帶寬是紫外分光光度計分析誤差的主要來源之一。一般來講, 目前國內(nèi)外的紫外分光光度計的儀器研究者或制造者, 在給出AA 或TA 時, 都不講明在什么光譜帶寬( SBW) 條件下測量, 這是不對的。
    A. Owen 在1988 年指出: “吸光度測量的準確度, 取決于儀器的SBW 與試樣的自然帶寬( NBW) 的比率。” ( 自然帶寬被定義為吸收值的1/ 2 處的吸收譜帶寬度)。Knowles 和A. Owen 在大量實驗的基礎(chǔ)上指出: SBW/NBW≤0. 1 時, 吸光度準確度可高達99. 5% ; 如果SBW/ NBW 增大, 則吸光度測量誤差會增加。A. Owen 還指出, NBW≥20 時, 2nm 的SBW 對于吸光度的準確測定是足夠的, 可滿足大約99% 的日常分析。這也是我國藥典規(guī)定用于藥檢的紫外可見分光光度計的SBW 一定要求≤2nm 的主要原因。
測量光度準確度時, 必須注意SBW 的選擇。具體理由是:
    ① SBW 小, 則對應(yīng)的狹縫寬度小, 此時的雜散光也小, 可提高吸光度測量的準確度。
    ② SBW 小, 對同一自然帶寬( NBW) 來講, 波長準確度會高。因為不同的波長有不同的摩爾吸光系數(shù), 所以, 波長準確度高時, Beer 定律的偏離也會小, 即光度準確度測試誤差小。
    ③ SBW 小, 則對應(yīng)的狹縫窄, 但單色光的單色性也好, 更能接近單色光, 也可減少Beer 定律的偏離, 提高測量精度。但必須注意, SBW 不能太小, 否則信號弱, 儀器的信噪比小, 靈敏度差。
   狹縫寬度是指紫外可見分光光度計狹縫的機械寬度。一般來講, 紫外可見分光光度計的制造者不會告訴用戶儀器的狹縫寬度, 在某種程度上講, 儀器的狹縫寬度是一個保密數(shù)據(jù)。但制造商應(yīng)該或必須告訴用戶儀器的光譜帶寬與狹縫寬度的關(guān)系為

    式( 4-13) 中, f 為焦距; m 為光譜級數(shù); d 為光柵常數(shù); q 為衍射角( 有些人用b 表示衍射角)。
    所以, SBW 與單色器物鏡的焦距f 有關(guān), 而狹縫寬度與單色器物鏡的焦距f 無關(guān)。
    必須指出, 光譜帶寬以nm 計, 而狹縫寬度以mm 計, 二者在計量單位上相差100 萬倍。所以, 那些稱紫外可見分光光度計儀器的狹縫寬度為多少納米是不對的。

(三) 光度準確度與波長重復性的關(guān)系
    在紫外可見分光光度計中, 波長重復性對光度準確度的影響是很大的。在紫外可見分光光度計中的使用過程中, 如選擇試樣的吸收峰作為測試波長, 則在重新設(shè)定該波長時, 產(chǎn)生的微小波長差對光度準確度測量的結(jié)果影響不大。但如果不是選擇被測試樣的吸收波長作為測試波長, 而是選擇吸收波長兩側(cè)的波長λ側(cè)作為測試波長( 見圖4-3 ) , 則同樣大小的波長誤差會產(chǎn)生很大的光度準確度測量誤差。
    由圖4-3 可知, Δλ1 = Δλ2 , 但ΔA1 n ΔA2 。因此, 在要求高精度測量時,為了得到更好的光度準確度, 一定要注意選用波長重復性好的紫外可見分光光度計儀器。并且, 在分析過程中, 特別要注意選擇試樣的吸收峰處的波長作為測試波長, 否則難以得到令人滿意的結(jié)果。

(四) 光度準確度與波長準確度的關(guān)系
    紫外可見分光光度計的波長準確度是很重要的; 特別在比較儀器時, 波長準確度顯得更加重要。因為物質(zhì)對不同波長的光吸收時, 有不同的摩爾吸光系數(shù)。摩爾吸光系數(shù)不同, 分析測試的靈敏度就不同。所以, 同一臺紫外可見分光光度計, 對同一試樣, 不同波長測試, 其結(jié)果不一樣。同樣, 兩臺波長準確度不同的紫外可見分光光度計, 對同一試樣, 在同一波長上測試, 其結(jié)果也會不同。所以, 波長準確度在某種程度上講, 決定光度準確度。