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毛細(xì)管電泳系統(tǒng)是最近幾年發(fā)展起來的一種全新的分離分析技術(shù),它是凝膠電泳技術(shù)的發(fā)展,是高效液相色譜分析的補(bǔ)充。該系統(tǒng)可分析的成分小至有機(jī)離子、大至生物大分子如蛋白質(zhì)、核酸等。可用于分析多種體液樣本如血清或血漿、尿、腦脊液及唾液等,HPLC分析高效、快速、微量。
毛細(xì)管電泳系統(tǒng)是以毛細(xì)管為分離通道,以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力,利用荷電粒子之間的淌度差異和分配系數(shù)差異進(jìn)行分離的儀器,是分析科學(xué)繼高效液相色譜儀之后的又一重大進(jìn)展。使分析科學(xué)從微升級(jí)進(jìn)入到納升級(jí),應(yīng)用十分廣泛。
毛細(xì)管電泳系統(tǒng)的工作原理:
毛細(xì)管電泳是一種在空芯的、極微小內(nèi)徑的毛細(xì)管中進(jìn)行的液-液相大、小分子的高效蛋白分離技術(shù)。
毛細(xì)管兩端分別浸入緩沖液中,而緩沖液中分別插入連有高壓電源的電極,根據(jù)被分離物之間電荷和體積的不同,帶電荷分子朝相反極性的電極方向移動(dòng)。又利用毛細(xì)管內(nèi)壁上的電荷和應(yīng)用的勢(shì)能而引起的電解質(zhì)移動(dòng),毛細(xì)管內(nèi)表面帶有硅羥基基團(tuán),當(dāng)毛細(xì)管內(nèi)充滿緩沖溶液時(shí),毛細(xì)管壁上的硅羥基發(fā)生解離,生成氫離子溶解在溶液中,這樣就使毛細(xì)管壁上形成雙電層,管壁是負(fù)電荷層,溶液是正電荷層。
在毛細(xì)管的兩端加上直流電場(chǎng)后,帶正電的溶液就會(huì)整體向負(fù)移動(dòng),形成了電滲流。無論是帶正電、帶負(fù)電或不帶電的粒子,都在電滲流的作用下,向陰極遷移,帶正電的,受到同方向的電場(chǎng)力作用,遷移,不帶電的遷移速度次之,帶負(fù)電的遷移速度最慢,(因?yàn)樗艿脚c電滲流反方向的電場(chǎng)力作用),從而實(shí)現(xiàn)各蛋白組分的分離。
毛細(xì)管電泳系統(tǒng)基本操作模式一般采用磷酸鹽或硼酸鹽緩沖液,實(shí)驗(yàn)條件包括緩沖液濃度、pH值、電壓、溫度、改性劑(乙腈、甲醇等),用于對(duì)帶電物質(zhì)(藥物、蛋白質(zhì)、肽類等)分離分析,對(duì)于中性物質(zhì)無法實(shí)現(xiàn)分離。毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜(MECC)為一種基于膠束增溶和電動(dòng)遷移的新型液體色譜,在緩沖液中加入離子型表面活性劑作為膠束劑,利用溶質(zhì)分子在水相和膠束相分配的差異進(jìn)行分離,拓寬了CZE的應(yīng)用范圍,適合于中性物質(zhì)的分離,亦可區(qū)別手性化合物,可用于氨基酸、肽類、小分子物質(zhì)、手性物質(zhì)、藥物樣品及體液樣品的分析。
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