凝膠過濾層析（SEC）的蛋白純化方法是怎樣的呢？

凝膠過濾層析又稱為分子篩或排阻層析，是利用蛋白分子大小和形狀的不同進行分離。以惰性細顆粒基質(zhì)作為層析柱填料，由于液體的擠壓，大分子物質(zhì)因無法進入細顆粒的微孔中而隨著液體從細顆粒間的縫隙流出，而小分子因進入細顆粒基質(zhì)內(nèi)微孔運動速度慢，保留時間長，比大分子物質(zhì)流出緩慢而分離。凝膠過濾的層析樣品不與層析柱料結(jié)合，因此，緩沖液成分不直接影響分辨率。

凝膠層析的固定相是凝膠。凝膠是一種不帶電荷的具有三維空間多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，凝膠的每個顆粒內(nèi)部都具有很多細微的小孔，如同篩子一樣。

特點：

1.通常多用于最后一步純化的有效方法；

2.整個SEC過程都只使用一種溶劑；

3.低聚物、去折疊的蛋白分子和缺失蛋白都可以在逐漸置換緩沖液的過程中與結(jié)構(gòu)完整的天然蛋白質(zhì)分子分離開；

4.SEC可使用溶劑種類更多，所用的緩沖鹽也更少，比透析的緩沖液置換過程更快更可靠；

5.介質(zhì)的類型和柱子的長度對蛋白質(zhì)的SEC分離的分辨率有很大的影響；

6.根據(jù)待分離蛋白質(zhì)分子的分子量和分離條件市場上有很多種排阻范圍的介質(zhì)可選。

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