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免疫組化非特異性染色的原因及避免方法有哪些呢?

來源:北京百奧創(chuàng)新科技有限公司   2023年11月01日 13:35  


免疫組織化學技術(shù)是應(yīng)用免疫學基本原理——抗原抗體反應(yīng),對組織或細胞內(nèi)抗原或抗體物質(zhì)定性和定位的組織化學技術(shù)。 組織的非特異性染色的機理很復雜,所以控制非特異性背景染色也不容易, 非特異性染色的識別常出現(xiàn)在組織邊緣、膠原纖維及血漿滲出處,壞死組織及固定不良的組織中心處。表現(xiàn)為彌漫性,均勻性的背景染色。也可以是隨機分布的陽性反應(yīng)產(chǎn)物點、團或塊狀。免疫組化非特異性染色的原因及避免方法有哪些呢?一起來學習一下吧!
 1. 靜電吸附
抗體是一種帶負電荷的球蛋白,容易和帶正電荷的組織相結(jié)合。 在用第一抗體前加制備第二抗體動物之非免疫血清封閉組織上的帶電荷基團,從而除去與第一抗體的非特異性結(jié)合。如果還不可以的話可能蛋白質(zhì)封閉不夠或所用血清溶血。 
2. 內(nèi)源性過氧化物酶
紅細胞,粒細胞的含量尤其高,鏡下可以識別,不要將其當成陽性結(jié)果。 

石蠟切片 3%雙氧水-甲醇溶液處理切片;
 3. 洗滌不che底
保證各步驟的PBS或TBS沖洗的時間和量,方法要得當,最好可以把切片放在裝滿洗液的染色盒內(nèi)浸泡一段時間以確保充分清洗。有一些人鑒于實驗經(jīng)費緊張,那吸管滴加標本上沖洗,這樣很難保證沖洗的干凈與否。這實際是千里之堤,潰于蟻穴。 
4. DAB顯色反應(yīng)時間過長
最好是在顯微鏡下時時觀察一避免顯色回見過長而引起的非特異性染色背景 
5. 一抗稀釋液

可以在一抗稀釋液內(nèi)適當添加1%BSA或合適濃度的二抗來源的血清。

以上就是有關(guān)于免疫組化非特異性染色的原因及避免方法有哪些的問題解答,如果你想了解更多請咨詢百奧創(chuàng)新客服哦~

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