測定BOD5時的水樣稀釋法分為一般稀釋法和直接稀釋法兩種。其中，一般稀釋法需要較多的稀釋水或接種稀釋水。

一般稀釋方法是在1L或2L量筒中加入約500mL稀釋水或接種稀釋水，然后加入一定體積的水樣計算，加入稀釋水或接種稀釋水至滿刻度，用玻璃杯末端帶有橡膠盤的桿被緩慢提起或浸沒在水面下。最后用虹吸管將混合均勻的水樣溶液引入培養瓶中，并使充滿溢出少許，小心蓋好瓶塞，并水封瓶口。對于第二或第三稀釋比例的水樣，可用剩余的混合溶液，計算后加入一定量的稀釋水或接種稀釋水，以同樣的方法混合后引入培養瓶中。

直接稀釋法是先用虹吸法將約一半體積的稀釋水或接種稀釋水引入已知體積的培養瓶中，然后沿瓶壁注入按稀釋倍數計算出的每個培養瓶中應加入的水樣體積，然后將稀釋水或接種稀釋水引入瓶頸，小心蓋上瓶塞，用水封住瓶口。

使用直接稀釋法時，要特別注意稀釋水的最后引入或稀釋水的接種不能太快。同時，需要尋找體積的操作規律，避免因溢出過多而導致誤差。

無論采用哪種方法，將水樣引入培養瓶時，動作一定要輕柔，避免產生氣泡，防止空氣溶入水中或水中氧氣溢出。同時，需要確保在關閉瓶蓋時一定要小心，以免瓶內有氣泡影響測量結果。培養瓶在培養箱中培養時，應每天都要檢查其水封情況，及時加水，防止封口的水蒸發，造成空氣進入瓶內。另外，5d前后使用的兩個培養瓶的體積必須相同，以減少誤差。