色譜圖出現雙峰解決辦法
來源:成都摩爾科學儀器有限公司
2025年03月24日 07:18
液相色譜儀的分析當中。在液相色譜柱正常情況下,樣品的靈敏度足夠。分析的方式合適,色譜峰在出峰的時間比較短的情況下。峰型應對稱并且是尖銳的。但是,在對樣品了解程度不夠。方法不足的時候,樣品的出來和進樣方法都不正確下,。***會出現各種想不到的問題和各種不滿意的結果,本文主要將解色譜出現雙峰的可能以及處理辦法
色譜雙峰可能的原因有三種。
1、液相色譜柱色譜柱
如果你分析樣品時發現每個色譜峰都雙峰出現(出峰越快,雙峰的可能性會減少),尤其采用單一純物質時,可以肯定色譜柱出問題,柱頭受損或柱頭固定相變臟或流失。
如果進樣量少,原來色譜柱正常,色譜峰的形狀多為一大峰帶一小峰,不一定拖尾,這一般應是柱頭受堵,將色譜柱反過來接,用流動相沖洗或酸洗或其它溶劑,將堵在柱頭的殘留物沖掉,再反過來,一般情況下***行了。
當然不反沖,正沖有時也會正常的。如果峰拖尾,雙峰強弱相差不大,柱頭固定相變臟或流失可能性更大,這是可以將進樣那頭擰開,將微孔濾片超聲,柱頭刮去一部分填料,重新填上新填料擰緊,不過這種活,需要一定技術,同時不能老干那種事,否則用不了幾次,色譜柱***會應柱效很低而報廢。
2、溶劑極性及進樣量
許多HPLC分析者對此可能不以為然,一般的HPLC的書籍和文獻都不會提到這方面的內容,而這確是雙峰產生的一個很重要的原因。目前HPLC分析多為反相色譜,流動相多為甲醇、乙腈、水,加各種添加劑以改善分離性能。
樣品一般用與流動相相溶的溶劑溶解。******的溶解方法是用流動相溶解,但是很多情況是不一致的。
當用溶劑極性強度大的試劑,如純甲醇、純乙腈,純乙醇,而分析體系中以水為主,樣品進樣量大,如定量管為20ul,此條件下******可以肯定,單一的純物質出雙峰,******峰比******峰?。看味疾惶粯樱?,且拖尾,保留時間會提前(相對進樣量少而言),將進樣量減少一半以上,峰型將變為正常。這是樣品的溶劑與流動相極性相差太大,而流動相來不及將其稀釋達到平衡造成的。
上面提到進樣量造成雙峰的一個原因,另一個原因是,進樣量不一定大,但******量很大,色譜圖上的雙峰緊靠在一起,基本上齊高,不拖尾(如果出峰很快,也可能是色譜柱問題)。將樣品稀釋再進樣***可以了,這是由于進樣量過大,色譜柱過載造成的。
3、樣品的特性
有些樣品由于其化學結構的特點,存在互變異構現象,而這種互變異構體無法分開,而是以一個動態平衡存在。在色譜分析時,在一個特定的條件下,一種物質將出現雙峰,雙峰靠的很近,基本齊高,不拖尾,條件稍一變化,尤其pH,雙峰現象將消失,如等。
有的樣品紫外的色譜圖上看不到雙峰,但在LC-MS下,用質譜檢測器,其質譜的總離子流圖上較明顯,例如農藥啶蟲瞇(吡蟲清)。