熒光定量PCR也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。熒光定量PCR的發(fā)展史是一部ABI、羅氏和伯樂等的蕩氣回腸的斗爭史，感興趣的可以去查查。該技術(shù)是目前成熟，使用廣泛的半定量PCR技術(shù)。

熒光染料法（SYBR Green I）：

SYBR Green I是熒光定量PCR常用的DNA結(jié)合染料，與雙鏈DNA非特異性結(jié)合。在游離狀態(tài)下，SYBR Green 發(fā)出微弱的熒光，但一旦與雙鏈DNA結(jié)合，其熒光增加1000倍。所以，一個(gè)反應(yīng)發(fā)出的全部熒光信號與出現(xiàn)的雙鏈DNA量呈比列，且會(huì)隨擴(kuò)增產(chǎn)物的增加而增加。由于染料是與雙鏈DNA的非特異性結(jié)合，因此可能產(chǎn)生假陽性的結(jié)果。

熒光探針法（Taqman 技術(shù)）：

PCR擴(kuò)增時(shí)，加入一對引物的同時(shí)再加入一個(gè)特異性的熒光探針。該探針為一直線型的寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)熒光報(bào)告基團(tuán)和一個(gè)熒光淬滅基團(tuán)，探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收，檢測不到熒光信號；PCR擴(kuò)增時(shí)（在延伸階段），Taq 酶的 5' —— 3' 切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴(kuò)增一條 DNA 鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與 PCR 產(chǎn)物形成全同步。臨床檢測中Taqman探針法是常用的檢測方法。