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細胞培養實驗基本操作2024/09/18
細胞培養實驗基本操作:1、進無菌室前要洗手,按規定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。2、操作者動作要輕,安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應在火焰近處并經過燒灼進行。但要注意,金屬器械不能在火焰中長時間燒灼,以防退火;燒過的器械要冷卻后才能使用;已吸過培養液的吸管不能再用火焰燒灼,因殘留在吸管內的培養液成分如蛋白質等燒焦后會產生有害物質,吸管再用時會將其帶到培養液中;膠塞、橡皮乳頭及塑料的細胞培養用品過火焰是也不能時間太長,以免燒焦產生有毒氣體,危害培養細胞,同時塑料細
PCR反應總RNA提取操作流程2024/09/09
PCR反應總RNA提取操作流程:1、A組織樣本:迅速將新鮮的組織切成合適的大小,在液氮中充分研磨后加裂解液裂解,或直接加入裂解液后用勻漿器勻漿。每30-50mg組織加1mlTrizol。2、B全血樣品:加入3-5倍體積的紅細胞裂解液到血樣中,室溫孵育10min,室溫3500rpm離心6min。棄上清,原每2-3ml全血樣品加1mLTrizol。3、C細胞樣品:懸浮液中生長的細胞,通過離心收集細胞后,每1×105?106細胞加入1mLTrizol,移液器吹打混勻,直接裂解或-80℃儲存一個月。貼壁
合適細胞株常見鑒定方法2024/09/02
當獲得多個雜交瘤細胞株時,要了解哪一株是適用的,則一定要通過各種鑒定。分析常見的方法有:1、Ig類型測定通常以免抗小鼠Ig類及亞類抗體與培養液中單克隆抗體按雙向瓊脂擴散法進行測定,確定其Ig類型或Ig亞類型別。2、特異性測定把與相應抗原有關的物質同McAb進行多種免疫學檢測,鑒定McAb的特異性。這直接關系到McAb應用的可靠性。3、抗體效價測定效價以腹腔積液或培養液的稀釋度表示,稀釋度越高,則抗體效價也越高。在凝集反應中,腹腔積液效價可達5萬以上;在ELISA中,腹腔積液效價可達100萬以上。
鑒定適合細胞株的常見方法2024/08/26
鑒定適合細胞株的常見方法:當獲得多個雜交瘤細胞株時,要了解哪一株是適用的,則一定要通過各種鑒定。分析常見的方法有:1、Ig類型測定通常以免抗小鼠Ig類及亞類抗體與培養液中單克隆抗體按雙向瓊脂擴散法進行測定,確定其Ig類型或Ig亞類型別。2、特異性測定把與相應抗原有關的物質同McAb進行多種免疫學檢測,鑒定McAb的特異性。這直接關系到McAb應用的可靠性。3、抗體效價測定效價以腹腔積液或培養液的稀釋度表示,稀釋度越高,則抗體效價也越高。在凝集反應中,腹腔積液效價可達5萬以上;在ELISA中,腹腔
ELISA(酶聯免疫吸附劑測定)常見樣本處理2024/08/19
ELISA(酶聯免疫吸附劑測定)是一種快速、靈敏、準確可靠的一種定量分析方法,樣本的處理對于ELISA實驗的成功有著舉足輕重的作用。1、血漿用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標本,標本采集后30min內4℃1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。常用的抗凝劑為EDTA和ca.(C12H16NS2Na3)20等,檢測時還應仔細閱讀試劑盒說明書,檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。2、血清血清是于ELISA檢測的一類樣
抗體的結構詳述2024/08/12
抗體的結構:抗體是能與抗原特異性結合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五類,即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。與免疫測定有關的Ig主要為IgG和IgM。Ig由兩個輕鏈(L)和兩個重鏈(H)的單體組成。Ig的輕鏈是相同的,有κ(kappa)和λ(Lambda)兩種型別。五類Ig的重鏈結構不同,這決定了它們的抗原性也不同。IgG和IgM的重鏈分別稱為γ(gamma)鏈和μ(mu)鏈。重鏈和輕鏈的N端的氨基酸排列順序因各種抗體而異,稱為可變區,分別用VH和VL表示。兩者
廣泛應用的特異性RNA酶抑制劑概述2024/08/05
下面介紹3種廣泛應用的特異性RNA酶抑制劑。1、RNA酶的蛋白質抑制劑是從人胎盤分離的一種蛋白質可與多種RNA酶緊密結合(KI≈3x1010)形成非共價結合的等摩爾復合物,使RNA酶失活。此蛋白質體內可能是血管生成素的抑制劑,血管生成素是氨基酸序列和推測的三級結構與胰RNA酶類似的一種血管生成因子,幾個廠家以不同的商品名出售這種抑制劑,該蛋白質應置于含5mmol/L二硫蘇糖醇(DTT)的50%甘油中,貯存于-20℃。抑制劑制品凍融數次后或放置在氧化條件下即應棄之不用,因為上述處理會使蛋白質變性從
CD44大鼠白細胞分化抗原44ELISA試劑盒特性匯總2024/07/30
CD44大鼠白細胞分化抗原44ELISA試劑盒特性匯總:靈敏度:有二層含義,1)為試劑檢出被檢物質的低量的能力;2)為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力。特異性:常用交叉反應率表示。含有與待測物相近結構部份的物質可能存在交叉反應,使測定結果升高,可能導致假陽性,所以交叉反應是評價其質量的關鍵指標。精密度:ELISA試劑一般指其批內CV%,其值應小于15%;定量試劑應同時考察線性范圍。準確度:通過添加回收實驗進行評價。簡便性:指在不影響試劑的前三項指標的前題下,實驗和測定步驟越少越好,在定性實驗中結果
大鼠原代細胞(Primary cells)分離培養實驗步驟2024/07/22
原代細胞(Primarycells)是指直接從機體取出的組織或細胞獲得單個細胞并在體外進行培養的細胞。組織主要指組織器官、外周血及胚胎等。由于原代細胞生長緩慢,繁殖一定的代數停止生長(一般10代以內)。實驗步驟:1.取7-10d雄性SD大鼠,頸椎脫臼處死,浸泡于75%乙醇消毒3-5min。2.在超凈工作臺中,將大鼠斷頭置于玻璃培養皿中,打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養皿中,去除小腦和間腦。3.將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管,再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養
多克隆抗體和單克隆抗體的用途簡述2024/07/15
多克隆抗體和單克隆抗體的用途:1、定義多克隆抗體和單克隆抗體有用性的兩個關鍵特征涉及它們各自對抗原的特異性和靈敏度。2、抗體的特異性是由其結合域和目標抗原之間的相對親和力決定的,而其他分子是存在的。對這種特異性的利用對免疫學研究人員和臨床醫生來說是至關重要的,因為許多應用都是利用多克隆和/或單克隆抗體來專門檢測目標分子。結合抗原特異性,抗體的靈敏度是一個重要的參數,決定了它在實驗室的實用性。3、高靈敏度的抗體非常適用于診斷應用,如免疫沉淀、WestBlot和酶聯免疫吸附試驗(ELISA),因為它
PCR檢測試劑盒實驗各種溫度設置2024/07/08
PCR又稱聚合酶鏈式反應,PCR的過程可看作是生物體外的特殊DNA復制,PCR的最大特點,是能將微量的DNA大幅增加。在PCR自動熱循環中,最關鍵的因素是變性與退火的溫度。其變性、退火、延伸的條件是:94℃60s,37℃60s,72℃120s,共25~30個循環,擴增片段500bp。在這里,每一步的時間應從反應混合液達到所要求的溫度后開始計算。在自動熱循環儀內由混合液原溫度變至所要求溫度的時間需要30~60s,這一遲滯時間的長短取決于幾個因素,包括反應管類型、壁厚、反應混合液體積、熱源(水浴或加
實驗室生化試劑盒選購參照要素2024/07/01
通常生化試劑盒可分為液體單試劑和液體雙試劑,前者特別適用于半自動生化分析儀和小型自動生化分析儀,使用方便,缺點是穩定性較差。與單試劑相比,雙試劑提高了抗干擾能力,具有穩定性能較好,可消除樣品自身空白等特點。此外還有多項同測組合試劑、濃縮試劑等。對新的試劑盒,我們首先要查看其資質是否齊全,是否為合法有效試劑等。其次,在實驗室,可參照要素選購生化試劑盒。一、試劑空白吸光度用蒸餾水做空白,用zhi定的空白液加入試劑作為樣品測試,在測試主波長下,記錄測試啟動時的吸光度(A1)和約5分鐘后的吸光度(A2)
大鼠elisa試劑盒?雙抗體夾心法操作方法2024/06/24
大鼠elisa試劑盒雙抗體夾心法操作方法:1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。2.加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。3.加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時
ELISA試驗移液技術注意點2024/06/24
酶聯免疫吸附試驗(ELISA)是一種基于多孔板的技術,用于確定生物樣品中的抗體、抗原或其他蛋白質的濃度,使用發色、熒光或發光的讀數。ELISA實驗試劑和樣品處理不當或儲存不正確會影響下游分析,因為不同的緩沖劑和試劑會有不同的儲存要求。例如,有些必須儲存在冰箱里,有些在室溫下,有些用感光罩(如鋁箔)。如果有計劃在未來的實驗中使用相同的樣品,那么應該把它們放入等分試樣中,需要時再取出來。這將避免多次冷凍/解凍循環,保持準確的結果。當樣品準備使用時,應在冰上解凍(或根據方案)。移液技術注意要點如下:1
PCR反應條件分析2024/06/18
PCR反應體系由反應緩沖液(10×PCRBuffer)、脫氧核苷三磷酸底物(dNTPmix)、耐熱DNA聚合酶(Taq酶)、寡聚核苷酸引物(Primer1,Primer2)、靶序列(DNA模板)五部分組成。各個組份都能影響PCR結果的好壞。PCR反應需要一定的條件才能完成,這些條件主要有以下方面:一、緩沖液任何一個生化反應都必須在一定的緩沖體系中進行,緩沖體系除了提供一定的pH緩沖能力外,還有一些有助于反應進行的成分。PCR反應緩沖液通常采用10mmol/LTris-HCl(pH8.3-9.0,
細胞培養實驗一般操作過程2024/06/12
細胞培養實驗一般操作過程:1、進無菌室前要洗手,按規定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。2、操作者動作要輕,安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應在火焰近處并經過燒灼進行。但要注意,金屬器械不能在火焰中長時間燒灼,以防退火;燒過的器械要冷卻后才能使用;已吸過培養液的吸管不能再用火焰燒灼,因殘留在吸管內的培養液成分如蛋白質等燒焦后會產生有害物質,吸管再用時會將其帶到培養液中;膠塞、橡皮乳頭及塑料的細胞培養用品過火焰是也不能時間太長,以免燒焦產生有毒氣體,危害培養細胞,同時塑
抗原抗體反應的特性是什么2024/06/03
抗原抗體反應是指抗原與相應抗體之間所發生的特異性結合反應。這種反應既可在機體內進行,也可以在機體外進行。抗原抗體反應的過程是經過一系列的化學和物理變化,包括抗原抗體特異性結合和非特異性促凝聚兩個階段,以及由親水膠體轉為疏水膠體的變化。由于抗體主要存在于血清中,在抗原或抗體檢測中多以血清為試驗材料,故將體外抗原抗體的免疫學反應也稱作血清學反應(serologicalreaction)。該反應既可用已知的抗原檢測未知的抗體,這是臨床上常用的血清學診斷方法;也可用已知的抗體檢測未知的抗原,如微生物及其
ELISA試劑盒結果的判定與報告2024/05/27
ELISA試劑盒結果的判定與報告:1、結果的判定嚴格依據試劑盒提供的陽性判定值(CO)進行結果判定。廠商提供試劑的同時,說明書上列出的CO值是建立在一系列科學試驗及統計研究的基礎上,不應隨意更改。定量測定需要制備標準曲線,根據標準曲線計算結果。2、灰區的設置通常情況下ELISA結果報告方式為“陰性”或“陽性”,在二者之間有一條明確的分界線,也就是所謂的陽性判定值即CO值,對于樣本的吸光度值(A)高于CO值就判斷為陽性,相反則判斷為陰性,然而在實際工作中經常會出現樣本A值位于CO值附近的人群,即E
實驗選擇合適抗體需要考慮的因素2024/05/20
抗體(英語:antibody),抗體是一類能與抗原特異性結合的免疫球蛋白。(免疫球蛋白不僅僅只是抗體)是一種由漿細胞(效應B細胞)分泌,被免疫系統用來鑒別與中和外來物質如細菌、病毒等的大型Y形蛋白質,僅被發現存在于脊椎動物的血液等體液中,及其B細胞的細胞膜表面。檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇,為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體,需要考慮的因素:1.實驗應用的類型一般抗體說明書都列出該抗體經試驗驗證過適用于何種分析類型,如:可以應用于WB/IHC/ICC/ELISA分析等,如果抗體說明
抗體的主要功能2024/05/13
抗體的主要功能:1、抗體能抑制病原體的生長繁殖,比如抗病菌的抗體就使入侵的病菌發生凝集,不讓病菌吸取營養,饑餓的病菌就不能繁殖了。2、抗體能阻止病毒或病菌靠近人體細胞,入侵者不能靠近人體細胞,就不能黏附在細胞上,它就不能破壞人體細胞,不能形成感染。3、抗體可以中和病毒,比如乙肝病毒(HBv),它的表面有一層蛋白質結構,并借此黏附到人的肝細胞表面,隨之鉆進肝細胞。而抗體在HBv沒有黏附前與其相遇,兩者出現表面結合,這一結合非常重要,使HBv表面的蛋白質發生改變,令其失去了黏附肝細胞的能力,不能進入
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