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南京信帆生物：發現LGR4在能量代謝和體重控制中發揮重要作用2016/06/09

研究人員新發現一個能夠在能量代謝和體重控制中發揮重要作用的因子，其稱之為LGR4。敲除LGR4可通過推動白細胞向棕色脂肪轉換，促進能量消耗。肥胖引發的種種問題肥胖是指一定程度的明顯超重和脂肪層過重，是體內脂肪，尤其是甘油三酯積聚過多導致對的一種狀態。WHO已將肥胖定義為一種疾病。隨著飲食習慣和生活方式的改變,世界各地肥胖的發病率逐年攀升，肥胖問題日趨嚴重。2008年*大約有15億人超重和肥胖。預計到2030年,超重和肥胖的人數將分別達到21.6億和11.2億。肥胖可導致胰島素、糖和血脂的血液水平

南京信帆生物：流式細胞儀2016/06/08

流式分析難怪研究人員一直將流式細胞儀作為CTC分析的工具。“流式細胞儀在從異質樣本中尋找稀有細胞的能力是*的，”BD生命科學的市場部TrentColville談道，“針對表面標志物的熒光標記抗體實現了CTC的鑒定。”隨著細胞通量的升高以及操作成本的降低，BD的FACSCantoII細胞分析系統及其他流式細胞儀正在解決這種大海撈針的挑戰。多樣化的流式檢測技術正幫助研究人員揭開這些復雜細胞的奧秘。探索了多參數流式細胞儀在這方面的應用，他們使用人ruxian癌的小鼠模型來模擬CTC分析的挑戰1。作者發

南京信帆生物：自己動手 制備預制膠品質的凝膠2016/06/07

幾年前，曾推出Stain-Free免染技術，大大簡化了蛋白電泳的凝膠分析。許多用戶都對此頗感興趣，但礙于它必須使用TGXStain-Free預制膠，成本太高。如今，帶來了一個好消息，TGXStain-Free預制膠也能自己制備了。此次推出了兩個版本的TGXFastCast丙烯酰胺試劑盒，一個是普通版，另一個是免染版本。這兩個試劑盒讓用戶能夠在灌制聚丙烯酰胺凝膠后，享受到快速運行、蛋白轉移以及可重復的結果。而免染技術能讓您在蛋白電泳和免疫印跡的全程進行監控。過去，制膠是個頗為耗時的過程，大約要苦等

南京信帆生物:血液中的寶藏：細胞外RNA2016/06/06

近年來，人們在血漿或血清樣本中成功檢測到了疾病相關的RNA（exRNA）。這些細胞外RNA可以成為非侵入性的疾病診斷指標，這是RNA檢測zui有前景的發展方向之一。在多種細胞受到破壞的疾病中（比如大腦損傷），循環miRNA是非常重要的生物學指標。研究這些miRNA的團隊很多，可供選擇的實驗方案也不少，不過研究者們還沒有就此達成一致。他們正在努力推動循環miRNA檢測的標準化，提升細胞外RNA研究的可重復性。胎盤囊泡：在renchen期間，胎盤會將包含RNA的囊泡釋放到母體血液中。從中鑒定胎盤疾病

南京信帆生物：新成像技術展示HIV包膜蛋白的動態圖像2016/06/04

HIV包膜蛋白Env會改變其形狀并采納數種不同的構型，這是它在病毒及宿主細胞膜融合之前需要完成的步驟。通過改變其形狀，它也能躲避抗體--這一現象促成了HIV的治療困難。科學家們對導致進入宿主細胞的Env的改變形狀的活性非常感興趣。他們能夠獲取處于不同構象的Env的靜態圖像，但無法獲得動態圖像，而能看到后者是有幫助的。在此用一種特別的過去還沒有用于這一蛋白——單分子FRET——的顯微鏡技術對Env中的動態變化做到了可視化。他們顯示，在進入宿主細胞前，該蛋白在3種不同的形狀之間來回變化。研究人員專注

南京信帆生物:次生林增加森林生態系統固碳能力2016/06/03

自上世紀80年代起，我國就開始堅持不懈地推行植樹造林工程。統計數據顯示，我國森林面積已達1.95億公頃，其中人工林面積0.62億公頃，為世界zui大，占全國森林總面積的30%以上;過去20年中，我國人工林碳吸收量累計超過4.5億噸，為緩解碳減排壓力作出了積極貢獻。同時，為更加積極應對氣候變化,*于2009年在聯合國氣候變化峰會上提出，到2020年新造林4000萬公頃，以進一步提高我國森林的固碳效益。然而，雖然熱帶、亞熱帶是*的生物減排潛力zui大的區域，但位于亞熱帶的我國東南林區，森林質量在全國

南京信帆生物：如何降低ELISA的背景2016/05/28

ELISA實驗的原理似乎很簡單，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗滌和封閉。然而，即使是平淡無奇的洗滌和封閉，如果做得不太好，也有可能毀了整個實驗。在實驗結束時，我們是否能獲得有意義的信息，這在很大程度上取決于結果的信噪比。背景噪音會影響您對結果的判斷。如何降低ELISA的背景，下面有一些tips。洗滌很重要洗滌步驟看似很無聊，其實很重要，因為如果未結合的材料（如非特異結合的抗體或檢測試劑）殘留在微孔板中，那么它會增加背景噪音。如有必要，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會阻非特異結合反

南京信帆生物：蛋白電泳手灌膠全新體驗2016/05/26

近期Bio-Rad公司推出了的FastCast™TGX™丙烯酰胺預混液以替代傳統的制膠試劑，為研究者提供了新的凝膠選擇。與普通丙烯酰胺試劑zui大的不同是FastCast™TGX™試劑凝膠可耐受300V分離電壓，在通常情況下可將傳統的SDS-PAGE實驗時間從1-2小時縮短至15分鐘，而且保證條帶的清晰與銳利。FastCast™TGX™試劑凝膠還提供高于常規Tris-HCl體系凝膠的轉印效率，以保證WesternBlot數據的高度可靠性。FastCast™TGX™丙烯酰胺預混液使得實驗操作者避免

南京信帆生物：Sigma去糖基化試劑盒之使用心得2016/05/25

Sigma-Aldrich的天然蛋白去糖基化試劑盒（NativeProteinDeglycosylationKit，貨號NDEGLY）可在天然條件下去除糖蛋白上的N連接寡糖。糖基化蛋白修飾通常位于折疊蛋白中不容易接近的位置，因此在未變性的情況下，不大可能通過標準的肽N-糖苷酶F（PNGaseF）處理來去除。如果您的下游分析需要折疊蛋白（如酶學分析或蛋白相互作用分析），那么這個試劑盒也許適合您。此試劑盒包含了內糖苷酶F1、F2和F3，以及相應的反應緩沖液。與PNGaseF相比，這些內糖苷酶對蛋白構

南京信帆生物：讓蛋白純化像提質粒一樣簡單2016/05/24

與核酸純化相比，蛋白純化可是一項相當艱苦的工作。純化時間長，操作步驟繁瑣。有時，在實驗室呆了一整天，換來的卻是讓人傷心的結果，蛋白得率低，純度差。這時你也許會想，如果純化蛋白像提質粒一樣簡單就好了。如今，你的夢想成真了。Clontech（Takara旗下）推出了新一代的蛋白純化試劑盒–His-TaggedPurificationMiniprepKit。真的就像質粒純化一樣，加樣、結合、清洗、溶出，幾次離心，5分鐘即可純化出100μgHis-tag融合蛋白。這個系統在純化柱中安裝了尼龍膜，能夠在室

南京信帆生物：人高分子量脂聯素ELISA試劑盒2016/05/22

脂聯素，也稱為30kDa的脂肪細胞補體相關蛋白（Acrp30），是一種主要由脂肪細胞分泌的激素，它調控了多個代謝過程。它合成時為30kDa的單體，隨后組裝成低分子量（LMW）的同源三聚體，包含兩個以二硫鍵連接的單體以及另一個非共價連接的亞基。2同源三聚體進一步形成中等分子量（MMW）的六聚體和高分子量（HMW）的多聚體。1,2盡管三種分子量的脂聯素異構體都存在于血漿中，但HMW的脂聯素是主要的生物活性形式。3脂聯素通過對葡萄糖和脂肪酸代謝的多個作用來促進胰島素敏感性，常常與TNF-α的作用相反。

南京信帆生物：磁性細胞分選的4個考慮因素2016/05/21

從復雜的細胞混合物中分離出特定的細胞，是研究人員經常要面對的挑戰。就目前而言，三種應用zui廣泛的技術是：離心、熒光激活細胞分選（FACS）和磁性細胞分選。離心是*的，但也zui不特異，主要依靠細胞的物理特征（如密度）進行分離，而基于表型分離細胞的能力有限。FACS和磁性細胞分選比離心要特異得多，因為這些方法利用抗體來識別目標細胞。利用FACS，細胞可根據幾個抗原的表達來分離。磁性分選則于1-2個抗原，但優點不少。它的平臺更為簡單，成本要低得多，并且處理時間也更短。也許你正躍躍欲試，那么，你需要

南京信帆生物：輕松捕獲microRNA的靶標2016/05/19

整個過程大致如下：1.創建miRNA模擬物。2.將這些miRNA模擬物和pMirTrap載體共轉染到哺乳動物細胞，并孵育24小時。同時利用miR-132、pMirTrap載體和pMirTrap對照載體開展對照轉染。3.利用附帶的MirTrap分離試劑盒裂解轉染后的細胞培養物。4.利用分離試劑盒中的磁珠對RISC復合物（其中包括靶標mRNA）進行免疫沉淀。5.利用附帶的NucleoSpinRNAXS試劑盒分離與磁珠結合的靶標mRNA。6.通過qPCR或新一代測序分析分離出的RNA，鑒定出特定miR

南京信帆生物：測序儀：一臺也許并不夠2016/05/18

如今，基因組測序的新聞已變得司空見慣，不像幾年前，基因組草圖甚至能登上雜志的封面。隨著測序儀的價格不斷下探，你也考慮購入一臺。挑來選去，不知哪一臺更好。在這一期的《BioTechniques》上，JeffreyPerkel告訴你，一臺也許并不夠。新一代測序儀在上市之初，價格高昂，“土豪”實驗室購買。如今，選擇多了，價格也便宜了。比如Illumina新近推出的MiniSeq測序儀，售價僅為49,500美元（美國售價），每次運行有望產生7.5Gb，足以應對靶向測序的應用。在愛丁堡大學，本科生甚至可以

南京信帆生物：從互作揭開lncRNA的秘密2016/05/17

生物通報道：西方有這樣一句老話，通過一個人的朋友就可以判斷他的為人，這句話同樣適用于生物分子。如果你想知道某個生物分子的功能，可以從與它相互作用的分子入手。近年來，長非編碼RNA（lncRNA）得到了研究界的廣泛關注。如今，人們已經鑒定了大量lncRNA，但大多數lncRNA的功能還未明確。為了解決這一問題，研究者們開始對lncRNA的互作蛋白進行研究，并為此開發出了越來越多的分析工具。RNA結合蛋白免疫沉淀技術又稱為RIP（RNAimmunoprecipitation），可以說是RNA版的Ch

南京信帆生物：5羥甲基化研究背景及與疾病的關系2016/05/16

5hmC-哺乳動物DNA中的“第六堿基”早在上世紀70年代，Penn等人發現在哺乳動物DNA中存在5-羥甲基化胞嘧啶（5hmC）(Pennetal.,1972)。然而該發現并未得到反復證實(KothariａndShankar,1976)，因而5hmC也沒有受到應有的重視。直到2009年，Kriaucionis和Tahiliani兩位科學家證實小鼠的Purkinje細胞，顆粒神經元以及胚胎干細胞存在5hmC(KriaucionisａndHeintz,2009;Tahilianietal.,2009

南京信帆生物：RNA-seq數據分析指南2016/05/15

生物通報道：新一代測序技術在爆炸式發展的同時，也衍生出許多其他技術創新。RNA深度測序（RNA-Seq）就是其中之一，這項技術使我們對細胞發育及其調控機制的理解，達到了的深度和廣度。盡管研究細胞RNA并不是什么新鮮事，但RNA-Seq的出現大大拓展了轉錄組研究的規模，取得了累累碩果，這些是傳統技術難以企及的。RNA-seq可以獲得相當驚人的數據量，而這恰恰是一柄劍。豐富的數據量蘊含著大量的寶貴信息，但這樣的數據需要復雜的生物信息學分析，才能從中提取到有意義的結果。正因如此，數據分析可以說是RNA

南京信帆生物：利用沉淀實驗測定蛋白質等電點2016/05/14

蛋白質在PH等于等電點時，溶解度zui小。本文主要介紹了利用沉淀實驗測定蛋白質等電點的實驗原理、器材、試劑和具體操作步驟。蛋白質PH位于等電點時溶解度zui低一、蛋白質等電點的測定1、目的(1)了解蛋白質的兩性解離性質。(2)學習測定蛋白質等電點的一種方法。2、原理蛋白質是兩性電解質。蛋白質分子的解離狀態和解離程度受溶液的酸堿度影響。當溶液的pH達到一定數值時，蛋白質顆粒上正負電荷的數目相等，在電場中，蛋白質既不向陰極移動，也不向陽極移動，此時溶液的pH值稱為此種蛋白質的等電點。不同蛋白質各有其

南京信帆生物：單克隆抗體技術2016/05/13

一、單克隆抗體的概念和原理免疫反應是人類對疾病具有抵抗力的重要因素。當動物體受抗原刺激后可產生抗體。抗體的特異性取決于抗原分子的決定簇，各種抗原分子具有很多抗原決定簇，因此，免疫動物所產生的抗體實為多種抗體的混合物。用這種傳統方法制備抗體效率低、產量有限，且動物抗體注入人體可產生嚴重的過敏反應。此外，要把這些不同的抗體分開也極困難。近年，單克隆抗體技術的出現，是免疫學領域的重大突破。（1）單克隆抗體的基本概念抗體主要由b淋巴細胞合成。每個B淋巴細胞有合成一種抗體的遺傳基因。動物脾臟有上百萬種不同

南京信帆生物：免疫組化常見問題之無染色和弱陽性原因分析2016/05/12

當免疫組化染色沒有出現預期結果時，應系統地查找原因，而每一次只能排除一種可能的原因。對照/標本無染色①確認是否忽略了應該加的某種試劑，包括一抗、二抗、三抗及底物等。②確認所有的試劑是否按正確的順序加入，是否孵育了足夠的時間。③對照抗體的標簽確認是否使用了正確的抗體，以及所用的檢測系統是否和一抗匹配，這一點是非常重要的。比如，如果一抗是兔來源的抗體，二抗一定要用抗兔的二抗來匹配；或一抗是小鼠的IgM一抗，二抗必須是山羊/兔抗小鼠的IgM（不是IgG）二抗。④檢查抗體所使用的稀釋度及稀釋溶液。⑤檢查