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科研實驗對抗體需求指導

時間:2024/11/26閱讀:249
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科研實驗工作離不開抗體,WB、IP、IHC、IF、ChIP和FC都需要用到抗體,那么這幾種實驗技術都需要什么樣的抗體呢?

1.WB

WB的蛋白經過加熱變性之后都變成線性的結構。因此*好的抗體是采用非常特異序列的人工合成多肽的方法來做實驗,結果也非常特異。

2.IP/CHIP

我們用抗體去結合生理狀態下的蛋白質,因此IP的抗體最好使用純化的天然蛋白制作的抗體來做,也可以用純化的重組蛋白的抗體。最好不要用人工合成多肽制作的抗體,因為這種抗體識別的位點可能被深深地藏在了蛋白的內心深處。CHIP和IP沒有太大的區別,唯 yi 的問題在于,如果抗體識別的表位和該蛋白質與DNA結合的部位一致,則會導致CHIP實驗的失敗。

3. IF/IHC

免疫熒光和免疫組化中需要進行固定一步,固定是為了盡量讓細胞的形態結構維持和原有的一致。這種化學物質的固定使蛋白質變性凝固,與天然狀態下的蛋白質有了一定的區別,但是又不同WB中加熱變性變成了線性的結構。因此在做IF/IHC實驗中,最合適的抗體可以是純化的重組蛋白得到的抗體,也可以是人工合成多肽得到的抗體(多肽是在蛋白質的表面)

4.FC

流式細胞中分為兩種,一種是活細胞的流式,這種流失最好采用是天然蛋白或者重組蛋白的抗體來做,另外一種是經過固定之后的流式,和IF/IHC 所用抗體一致。 在做流式細胞中,我們有直接標記和間接標記,間接標記不如直接標記真實準確。因此我們選擇流式抗體要采用帶有熒光標記的抗體;如果研究的蛋白沒有直接標記的抗體,那么就采用間接標記抗體,需要添加熒光二抗。


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