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【CEM】寵物食品中牛磺酸含量的快速制備

時間:2024-12-25閱讀:110
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一、引言

寵物通常被視為我們直系家庭中毛茸茸的(有鱗、有羽毛等)成員,在現(xiàn)代生活中扮演著重要角色。寵物用品從加熱床到專業(yè)美容服務應有盡侑,因此它們的飲食受到更嚴格的審查也就不足為奇了。狗糧形式多樣,不同食譜對健康有益也有風險。近來,無谷物或富含豆類的飲食因其與犬類心臟病——擴張型心肌病(DM)之間的聯(lián)系而受到質疑,這種疾病可導致充血性心力衰竭,最終可能導致死亡。DM是由于缺乏牛磺酸引起的,因此狗的飲食必須含有足量的牛磺酸。


在本研究中,使用Discover Prep™系統(tǒng)水解狗糧樣本,以將氨基酸從其結合的蛋白質中釋放出來。與傳統(tǒng)的水解技術相比,Discover Prep利用微波進行樣本水解,將技術的時間框架從24小時縮短至不到一小時。水解后,樣本被中和,并使用Waters AccQ-Tag®試劑盒測量氨基酸含量。結果表明,與傳統(tǒng)方法相比,Discover Prep能夠迅速且準確地從寵物食品中的蛋白質水解出牛磺酸,具有很好的精確度。無谷物狗糧和含谷物狗糧樣本的牛磺酸含量進行了比較。對于實驗室量化狗糧中的牛磺酸和其他氨基酸而言,Discover Prep是一個理想的選擇。

【CEM】寵物食品中牛磺酸含量的快速制備

二、材料與方法

試劑和樣品

所有試劑均購自商業(yè)供應商。所有狗糧樣品均從當?shù)貙櫸镉闷返曩徺I。所有狗糧樣品均使用商用廚房攪拌機研磨。選擇這些狗糧是因為它們的主要蛋白質成分不同,并且標稱含有高含量的牛磺酸。分析了三個樣品:樣品1是三文魚、紅薯和南瓜配方,樣品2是雞肉和紅薯配方,樣品3是火雞和燕麥配方。水解溶液在使用前新鮮制備。

狗糧樣品使用CEM Discover Prep系統(tǒng)進行水解。通過柱前衍生化測定水解產(chǎn)物的氨基酸含量,然后通過UPLC®注射和在260 nm下的PDA檢測進行分析。使用Waters AccQ-Tag Ultra衍生化試劑盒對水解產(chǎn)物進行LC-PDA分析。Discover Prep樣品制備的結果與傳統(tǒng)烤箱法及營養(yǎng)標簽進行了比較。


Discover Prep樣品制備

100毫克狗糧樣品加入裝有攪拌棒的35 mL Discover Pyrex®小瓶中。記錄質量以供分析。對于酸性水解,向每個小瓶中加入5毫升含1%苯酉分的6 N HCl。所有小瓶用N2吹掃1分鐘,然后迅速蓋上蓋子。樣品按以下Discover Prep方法運行:


酸性水解

小瓶類型:Pyrex

控制類型:動態(tài)

溫度:160 °C

時間:30分鐘

壓力:300 PSI

功率:300 W

攪拌:高


傳統(tǒng)水解樣品制備

40毫克狗糧樣品加入適當?shù)牟A∑恐小S涗涃|量以供分析。對于酸性水解,向每個小瓶中加入2毫升含1%苯酉分的6 N HCl。所有小瓶用N2吹掃1分鐘,然后迅速蓋上蓋子。然后將小瓶放入設定為110 °C的空氣烘箱中24小時。


水解后樣品制備和衍生化分析

酸性水解樣品用6 N NaOH中和,并用0.26 µm PTFE注射器過濾器過濾。中和后,樣品用Waters AccQ-Tag試劑盒進行衍生化。向一個完整的回收小瓶中加入80 µL來自Waters AccQ-Tag Ultra衍生化試劑盒的硼酸緩沖液。然后,加入10 µL樣品并蓋緊蓋子渦旋。接著,向每個樣品反應中加入10 µL準備好的衍生化試劑。最后,將反應渦旋10秒鐘,然后在55 °C下加熱10分鐘進行分析。


分析

每個衍生化反應取1 μL樣品注入Waters AccQ-Tag Ultra C18柱(1.7 μm, 2.1 x 100 mm),該柱連接到帶有Waters PDA檢測器的Waters ACQUITY™ H-Class UPLC®。流速設定為0.4 mL/min。柱溫保持在55 °C,吸收波長監(jiān)測在260 nm。用于分離的洗脫梯度如表1所示。流動相為A: Milli-Q®水中稀釋10倍的Waters AccQ-Tag洗脫液AB: Waters AccQ-Tag洗脫液B。為了每種氨基酸創(chuàng)建校準曲線,使用Waters Amino Acid Food and Feed Standard KitWaters Corporation, SKU. 186009299)進行衍生化,濃度分別為1, 5, 10, 25, 50 pmol/μL。采用線性回歸法分析樣品。


1. 衍生化氨基酸分離所用梯度

【CEM】寵物食品中牛磺酸含量的快速制備

三、結果

【CEM】寵物食品中牛磺酸含量的快速制備

1. Discover Prep水解中回收的牛磺酸量

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2. 從狗糧中回收的氨基酸量

四、結論

Discover Prep微波反應系統(tǒng)成功水解了寵物食品中的氨基酸,并產(chǎn)生了與傳統(tǒng)烘箱水解相似的結果。在比較氨基酸含量時,傳統(tǒng)烘箱水解和Discover水解的結果%RSD均小于10%。在比較狗糧的牛磺酸含量時,樣品1的含量最高,其次是樣品2和樣品3。


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