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小鼠主動脈組織提取物?操作流程2022/06/07

小鼠主動脈組織提取物操作流程：1.1產品僅用于科研主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本olympusimt-413），co2孵箱（日本yamatoit-61）。1.2細胞的復蘇培養傳代及凍存：1.2.1細胞的復蘇培養從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液,以1×1

總結細胞生長緩慢的原因2022/05/31

解析細胞生長緩慢的原因1、培養基可能缺乏細胞生長所需的某種因子。通常情況下，當小伙伴購買細胞，并沒有按照ATCC或國內細胞庫的方法制備培養基，使用實驗室兄弟姐妹使用的培養基來培養細胞。解決方法一般是按照的方法制備培養基，或直接購買培養細胞的培養基。2、細菌、支原體、真菌等污染。雖然培養基中通常添加雙抗體(和)，但如果無菌操作觀念不強，仍有可能造成污染。處理方法:如果有冷凍細胞，可以丟棄污染細胞。當然，丟棄并不是隨意的，扔進垃圾桶。應按照實驗室生物安全規定進行。然后復蘇培養物，建議培養箱*消毒。如

大鼠甘油三酯elisa酶聯免疫試劑盒使用方法2022/05/23

大鼠甘油三酯elisa酶聯免疫試劑盒使用方法：1.加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。給酶標板覆膜，37℃孵育2小時。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。2.棄去液體，甩干，每個孔中加入DetectionAb工作液100μl(在使用前15分鐘內配制)，酶標板加上覆膜，37℃溫育1小時。3.棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘

豌豆內源基因PCR檢測試劑盒實驗流程2022/05/17

豌豆內源基因PCR檢測試劑盒實驗流程：1.產品僅用于科研取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。2.兩相分離每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。3.RNA沉淀將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等

傳代培養?實驗步驟2022/05/09

傳代培養是組織培養常規保種方法之一。也是幾乎所有細胞生物學實驗的基礎。當細胞在培養瓶中長滿后就需要將其稀釋分種成多瓶，細胞才能繼續生長。這一過程就叫傳代。傳代培養可獲得大量細胞供實驗所需。傳代要在嚴格的無菌條件下進行，每一步都需要認真仔細的無菌操作。實驗步驟:1.入無菌室之前用肥皂洗手，用75%酒精擦拭消毒雙手。2.倒置顯微鏡下觀察細胞形態，確定細胞是否需要傳代及細胞需要稀釋的倍數。將培養用液置37℃下預熱。3.超凈臺臺面應整潔，用0.1%新潔爾滅溶液擦凈。4.打開超凈臺的紫外燈照射臺面20mi

創傷弧菌快速檢測試劑盒實驗操作步驟2022/04/24

試劑準備：1.DNA模板2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）3．10×PCRBuffer4．2mMdNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM5．Taq酶操作步驟：1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。10×PCRb

收到細胞處理流程2022/04/19

收到細胞處理流程：1、首先，觀察細胞培養瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有，請拍照，（所拍照片將作為后續服務依據）。2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養瓶蓋，將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時，以便穩定細胞狀態。3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。4、靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照，記錄細

RNA的提取與核酸的顏色反應操作步驟2022/04/13

RNA的提取與核酸的顏色反應操作步驟:1.取材在天平上準確稱取干酵mu3.00g，轉移至100mL錐形瓶中。2.濃鹽浸提取27mL10%NaCl溶液，加入到含干酵mu的錐形瓶中，攪拌均勻；置于90～100°C水浴中，浸提30～60分鐘；冷卻。3.離心將錐形瓶中提取液和沉淀全部轉移至100mL離心管中，取10mLH2O洗滌錐形瓶，并入離心管中；平衡后以4000轉/分鐘離心15分鐘；將上清液（即RNA提取液）傾入50mL燒杯中，棄去沉淀（菌體殘渣）。4.沉淀RNA(1)冷卻：將50mL燒杯置于放有冰

熒光素的選擇參考五個方面2022/04/02

在流式細胞術實驗，各種熒光素標記的抗體是必須的。那么熒光素該如何選擇呢，通常會參考以下5個方面：1.流式細胞儀配置：儀器需滿足激光管可激發相應的熒光素且可同時檢測所需的熒光。附常見熒光素的激發波長和發射波長：2.染料的亮度與抗原表達量相匹配：低表達抗原，推薦使用亮熒光染料；高表達抗原，推薦使用弱熒光染料。3.熒光染料重疊最小化：盡量選擇光譜重疊小的熒光素，如FITC/PE-Cy7；選擇不同激光激發的熒光素，如FITC/APC，PE/APC。光譜重疊嚴重的熒光素同時檢測會導致熒光溢漏，需調節補償。

小鼠多配體聚糖1 elisa定量檢測試劑盒雙抗體夾心法2022/03/29

小鼠多配體聚糖1elisa定量檢測試劑盒用途：用于測定人血清、血漿、組織及相關液體樣本中的含量或活性。雙抗體夾心法(檢測未知抗原):1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次。2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。3、加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃孵育0.5～1小時，洗

?小鼠骨髓瘤細胞復蘇操作要點2022/03/22

小鼠骨髓瘤細胞復蘇操作要點：1、將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。2、將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。3、用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的

解析Western blot(WB)實驗原理2022/03/16

WB是一種把電泳分離的組分從凝膠轉移到一種固相支持物(NC膜或PVDF膜)，并以針對特定氨基酸序列的特異性試劑作為探針檢測。WB采用抗體作為探針，抗體可以與附著在固相支持物的靶蛋白的抗原表位發生抗原-抗體免疫反應。這種技術的作用是對細胞或組織提取的蛋白混合物(即總蛋白混合物)中的某一特異蛋白進行鑒別和半定量分析，旨在鑒別特異性蛋白的類型(如亞型、聚體、剪切體等)和蛋白表達量的變化。WB可大致分為以下7步，分別是蛋白提取、蛋白定量、SDS-PAGE電泳、電轉印、封閉、抗原-抗體免疫反應、蛋白檢測。

大鼠外周血白細胞產品特點2022/03/07

產品特點:1、使用方便:不需昂貴設備。2、可以處理各種細菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。3、將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。4、采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。5、含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。6、紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。7、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋

甘油三酯的提取2022/03/01

甘油三酯，它是長鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，也是人體內含量最多的脂類，大部分組織均可以利用甘油三酯分解產物供給能量，同時肝臟、脂肪等組織還可以進行甘油三酯的合成，在脂肪組織中貯存。它不僅是細胞膜的主要成分，也是重要的呼吸底物和供能物質，在脂肪酸運輸過程中具有重要作用。血清中內源性三酰甘油主要以VLDL的形式運輸，外源性三酰甘油主要以CM的形式運輸，甘油三酯含量的增高與動脈粥樣硬化性心血管疾病密切相關。甘油三酯經KOH皂化水解生成甘油及脂肪酸，過碘酸氧化甘油生成甲醛，在銨離子存在下甲醛能夠與乙酰

了解流式抗體選擇要素2022/02/22

1.流式抗體本身也是抗體，所以選擇流式抗體一定要滿足抗體選擇最基本的條件：目標蛋白特異性，反應種屬以及應用實驗。2.流式抗體熒光標記的方式包括直接標記和間接標記兩種。在流式實驗過程中，盡量減少實驗工序和過程，以保證實驗的真實和準確性。因此在條件允許的范圍內，建議盡量用直接標記的抗體進行實驗而不去做間接標記。3.流式抗體熒光標記的選擇：如果實驗中檢測單一指標：不同熒光標記在不同的儀器上強度不同。FACSCalibur儀器為例：PEAPCPE-Cy5PerCPFITCPerCP-Cy5.5，通常來說

細胞因子風暴是什么2022/02/14

細胞因子又稱炎癥風暴，是指機體免疫系統過度激活時，液中多種細胞因子如TNF-α、IL-1、IL-6、IL-12、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、MCP-1和IL-8等迅速大量產生的現象，是引起急性呼吸窘迫綜合癥和多器官衰竭的重要原因。一旦發生細胞因子風暴可迅速引起單器官或多器官功能衰竭，較終威脅生命。免疫細胞通過細胞因子彼此溝通，細胞因子是細胞釋放到血液中的小分子，可以令免疫細胞沖到感染部位、吞噬遭到損傷的細胞，甚至穿透血管壁。細胞因子還可以引發炎癥，令被破壞的機體腫脹、發熱以及疼痛。細胞因

實驗器皿正確清洗的方法2022/01/27

常規洗滌法（一般容器）：1.清洗實驗器皿前先用肥皂洗手。2.先用自來水沖去灰塵，再用毛刷蘸洗滌劑液仔細刷凈內外表面，之后邊刷邊用水沖至無洗滌劑液;3.再用自來水沖洗3～5次，去離子水沖洗3次。4.不便刷洗的實驗器皿先用洗滌劑液浸泡后用水沖洗。洗凈的玻璃器皿內外不掛水珠，器壁上殘留的水用指示劑檢查為中性。5.去污粉不得用于洗滌刻度器皿和玻璃儀器內壁，以防劃傷玻璃。不同材質器皿的洗滌：1.銀、鎳和鐵質器皿用NaOH熔融，也可用1：3稀HCl短時間浸泡后用水沖洗2.瑪瑙器皿不宜浸洗，要先用洗滌劑洗后用

超氧化物歧化酶3抗體的鑒定2022/01/18

超氧化物歧化酶3抗體的鑒定：1、抗體的效價鑒定：鑒定效價的方法很多,包括有試管凝集反應,瓊脂擴散試驗,酶聯免疫吸附試驗等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價,一般就采用瓊脂擴散試驗來鑒定。2、抗體的特異性鑒定：抗體的特異性是指與相應抗原或近似抗原物質的識別能力。抗體的特異性高,它的識別能力就強。衡量特異性通常以交叉反應率來表示。交叉反應率可用競爭抑制試驗測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線,計算各自的結合率,求出各自在IC50時的濃度,并

馬克斯克魯維酵母菌種的培養過程2022/01/11

菌種的培養過程：1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）三級。工業發酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復篩。2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經過擴大培養成為具有一定數量和質量的純菌種的制備過程。以作接入發酵罐中進一步擴大菌體量及合成產物之用。3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。4、保存在沙土管或冷凍管中的菌種，用無菌手續挑取少許，接入瓊脂斜面培養基上，在25℃（或較高溫度）

流式細胞術（FCM）知識小課堂2022/01/05

FCM是利用流式細胞儀對處在快速直線流動狀態中的單列細胞或生物顆粒進行逐個、多參數、快速的定性、定量分析或分析技術。然而，在FCM的實際應用過程中，要想得到高質量的流式數據卻并非易事。現就FCM實驗中的常見問題進行分析，希望能幫助相關實驗人員提高實驗成功率。1.怎么選擇合適的對照？1）同型對照：使用同型抗體做平行實驗，主要目的是消除抗體與樣本的非特異性結合。2）陰性細胞對照：使用已知的不表達目標抗原的細胞做平行實驗，主要目的是消除抗體的非特異性結合。3）二抗對照：第二抗體多為熒光標記的多抗，非特