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ELISA檢測試驗雙抗體夾心法和競爭法比較2025/07/17

酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專一性進行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法。它是應(yīng)用最多的一種免疫酶技術(shù)。ELISA試劑盒（ELISAKits）已成為藥物和植物病理學(xué)研究中的常用診斷工具，是檢測組織提取液、血清和細胞培養(yǎng)液中目標抗體/抗原的理想工具，也是重要的質(zhì)量控制手段。ELISA檢測試驗雙抗體夾心法和競爭法有以下幾個方面的比較：1、原理:雙抗體夾心法：利用兩種針對抗原不同

ELISA常用測定方法的特點2025/07/08

ELISA是一種廣泛應(yīng)用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術(shù)。酶聯(lián)免疫吸附試驗的標準程序，通常是把蛋白、抗體、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗體（captureAb）固定在固相載體上，再加入一級檢測抗體（primarydetectionAb），形成一個抗原抗體的復(fù)合物。如果該抗體已經(jīng)用酶（enzyme）標記了，即可用來直接測定抗原的量，若無，則可利用另一個酶標記的二級抗體來測定抗原的量。測定抗原量的方法是加入該酶的底質(zhì)（substrate），作用后產(chǎn)生出現(xiàn)的顏色深淺和樣本中的抗原

結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移關(guān)聯(lián)基因1elisa方法說明書2025/06/30

結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移關(guān)聯(lián)基因1elisa方法說明書試劑盒組成:1、30倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2、酶標試劑6ml×1瓶8標準品（160pg/ml）0.5ml×1瓶3、酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4、樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5、顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6、顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個試劑盒性能：1.靈敏度：最小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。2.特異性：不與其它細胞因子反應(yīng)

ELISA試劑盒是否檢測目的抗原鑒定方法2025/06/16

利用干擾實驗即可辨別ELISA試劑盒是否檢測目的抗原，方法如下：1、將針對試劑盒特異性的重組蛋白抗原和試劑盒中的檢測抗體配置成antibody:antigen≈1:2的混合孵育液。2、37℃孵育15分鐘后，代替原試劑盒中的檢測抗體。3、后續(xù)操作按照試劑盒說明書進行，加檢測抗體、酶復(fù)合物和底物。4、實驗完畢后，檢測其標準曲線，如果標準曲線良好則說明加入的目的抗原和試劑盒抗體不匹配，試劑盒檢測抗體針對的是非目的抗原，該試劑盒為偽劣假造elisa試劑盒。5、如果標準曲線無線性，則說明試劑盒檢測抗體已被

細胞轉(zhuǎn)染三類途徑介紹2025/06/09

轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。轉(zhuǎn)染的途徑大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類：1.物理介導(dǎo)：電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因?qū)爰毎姆独?.化學(xué)介導(dǎo)：方法很多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)。3.生物介導(dǎo)：方法有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。理想細胞轉(zhuǎn)染方法，應(yīng)該具

逆轉(zhuǎn)錄實驗三大要素講解2025/06/04

逆轉(zhuǎn)錄是以RNA為模板合成DNA的過程，即RNA指導(dǎo)下的DNA合成，逆轉(zhuǎn)錄實驗包括3大要素，分別是引物、逆轉(zhuǎn)錄酶和RNA模板：1.引物：逆轉(zhuǎn)錄引物主要有3種，包括Oligo（dT）、RandomPrimers和基因特異性引物（GSP）。其中Oligo（dT）具有12-20個T堿基，并且與真核生物mRNA的3’PolyA尾配對，可合成全長的cDNA，但僅擴增有polyA尾的mRNA，對模板質(zhì)量要求高，較適合克隆實驗。而RandomPrimers具有6-9個堿基，可隨機識別模板并結(jié)合，適合復(fù)雜結(jié)構(gòu)和

PCR反應(yīng)擴增DNA的原理2025/05/27

先將含有所需擴增分析序列的靶DNA雙鏈經(jīng)熱變性處理解開為兩個寡聚核苷酸單鏈，然后加入一對根據(jù)已知DNA序列由人工合成的與所擴增的DNA兩端鄰近序列互補的寡聚核苷酸片段作為引物，即左右引物。此引物范圍就在包括所欲擴增的DNA片段，一般需20-30個堿基對，過少則難保持與DNA單鏈的結(jié)合。引物與互補DNA結(jié)合后，以靶DNA單鏈為模板，經(jīng)反鏈雜交復(fù)性(退火)，在TaqDNA聚合酶的作用下以4種三磷酸脫氧核苷(dNTP)為原料按5'到3'方向?qū)⒁镅由臁⒆詣雍铣尚碌腄NA鏈、使DNA重新復(fù)制成雙鏈。然后

細胞生長過程期間介紹2025/05/14

細胞生長過程：游離期；貼壁期；潛伏期；對數(shù)生長期；停止期（平臺期）1.游離期：細胞接種后在培養(yǎng)基中呈懸浮狀態(tài)，也稱懸浮期。此時細胞質(zhì)回縮，胞體呈圓球形（10min-5h）。2.貼壁期：細胞附著于底物上，游離期結(jié)束。大部分細胞株在10min－5h內(nèi)貼壁。底物：膠原、玻璃、塑料、其它細胞等血清中有促使細胞貼壁的球蛋白和纖粘素、膠原等糖蛋白（生長基質(zhì)），這些帶正電荷糖蛋白的促貼壁因子先吸附于底物上，懸浮細胞再附著在吸附有促貼壁因子的底物上。高級培養(yǎng)瓶多涂有生長基質(zhì)以幫助細胞貼附。3.潛伏期：此時細胞有

聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)循環(huán)參數(shù)分析2025/05/06

聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)是在體外進行的由引物介導(dǎo)的酶促DNA擴增反應(yīng)。PCR的原理是在模板DNA、PCR引物、四種脫氧核糖核苷酸(dNTP)及適當濃度的Mg2+存在的條件下，依賴于DNA聚合酶的體外酶促合成反應(yīng)。兩個引物分別位于靶序列兩端，同兩條模板的3’端互補，由此限定擴增片段。PCR反應(yīng)由一系列的變性→退火→延伸反復(fù)循環(huán)構(gòu)成，即在高溫下模板雙鏈DNA變性解鏈，然后在較低溫度下同過量引物退火，再在適中溫度下由DNA聚合酶催化進行延伸。理論上，經(jīng)過N次循環(huán)可使特定片段擴增到2n-1，考慮到擴增

蛋白質(zhì)免疫印跡(wb)的實驗步驟2025/04/27

Westernblot（也稱為蛋白質(zhì)免疫印跡）是一種常用于研究中分離和鑒定蛋白質(zhì)的技術(shù)。它利用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)來分離指定樣品中包含的各種蛋白質(zhì)，然后將分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素或PVDF膜上，接下來將膜與對感目標蛋白質(zhì)的特異抗體一起孵育。在洗膜過程中，未結(jié)合的抗體被洗掉，只留下與目標蛋白質(zhì)結(jié)合的抗體，最后通過顯影膠片或熒光掃描來檢測結(jié)合的抗體。westernblot的實驗步驟：1.把聚丙烯酰胺凝膠中的蛋白質(zhì)電泳轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上。1）轉(zhuǎn)移緩沖液洗滌凝膠和硝酸纖維素

ELISA標準品正確溶解與稀釋2025/04/21

正確溶解與稀釋ELISA標準品ELISA標準曲線是結(jié)果計算的尺子，標準品是ELISA實驗成功與否的關(guān)鍵點。怎樣正確溶解、稀釋標準品呢？1.粉末標準品短暫離心，讓因運輸沾到管蓋、管壁的標準品沉到管底。2.根據(jù)瓶標簽加入一定體積的蒸餾水，加水后輕柔渦旋震蕩，室溫靜置溶解10-30min，讓粉末全溶解。注意：加水后暫不用移液槍吹吸，避免蛋白未溶解，槍頭帶出部分蛋白，待全溶解后可吹吸或渦旋振蕩混勻。3.標準品梯度稀釋:（1）標準品稀釋液的選擇：若血清、血漿、組織勻漿樣本，用試劑盒中的標準品稀釋液，梯度稀

細胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基的方法2025/04/14

細胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基的方法：1.直接適應(yīng)——細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基（SFM）中。一些類型細胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應(yīng)無血清培養(yǎng)基。對于直接適應(yīng)，接種細胞密度應(yīng)該:2.5×105~3.5×105細胞/ml。當細胞密度達到1×106~3×106細胞/ml時，傳代培養(yǎng)細胞。當細胞密度在培養(yǎng)4到7天后達到2×106~4×106細胞/ml時，細胞全適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基。每隔3~5天，當細胞密度達到1×106~3×106細胞/ml，細胞活率在90％時，貯備的適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)物

標準物質(zhì)的制備一般步驟2025/04/07

標準物質(zhì)的制備是一個關(guān)鍵的過程，確保其質(zhì)量和可追溯性。下面是標準物質(zhì)的制備一般步驟：1、確定目標物質(zhì)和純度要求：確定所需的目標物質(zhì)以及其純度要求。這可能涉及從商業(yè)供應(yīng)商購買純品，從自然來源提取物質(zhì)，或者通過化學(xué)合成等方式制備目標物質(zhì)。2、基于定量分析方法：建立適當?shù)亩糠治龇椒ǎ源_保目標物質(zhì)的含量可以準確地測量。這通常涉及使用已知濃度的標準物質(zhì)進行校準和驗證。3、制備溶液或混合物：根據(jù)定量分析方法，準備目標物質(zhì)的溶液或混合物。這可能包括將目標物質(zhì)溶解于適當?shù)娜軇┲校凑仗囟ǖ呐浔然旌稀?、純

PCR反應(yīng)的三個基本步驟介紹2025/03/31

PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性-退火-延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：1、模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準備；2、模板DNA與引物的退火（復(fù)性）：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合；3、引物的延伸：DNA模板-引物結(jié)合物在72℃、DNA聚合酶（如Taq

實時熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)簡介2025/03/24

熒光定量PCR也叫Real-TimePCR，是美國PE（PerkinElmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。熒光定量PCR的發(fā)展史是一部ABI、羅氏和伯樂等的蕩氣回腸的斗爭史，感興趣的可以去查查。該技術(shù)是目前成熟，使用廣泛的半定量PCR技術(shù)。熒光染料法（SYBRGreenI）：SYBRGreenI是熒光定量PCR常用的DNA結(jié)合染料，與雙鏈DNA非特異性結(jié)合。在游離狀態(tài)下，SYBRGreen發(fā)出微弱的熒光，但一旦與雙鏈DNA結(jié)合，其熒光增加1000倍。所以，一個反應(yīng)發(fā)出的全部熒

抗體依據(jù)重鏈抗原性分類及其主要功能2025/03/17

抗體依據(jù)重鏈抗原性的不同分為五類：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。各類抗體主要功能有：IgG：血清中含量最高，因此是最重要的抗感染分子，包括抗菌、抗病毒、抗毒素等。IgG還能激活補體，結(jié)合并增強巨噬細胞的吞噬功能（調(diào)理作用和ADCC效應(yīng)），穿過胎盤，保護胎兒及新生嬰兒免受感染。IgA：分單體和雙體兩種。前者存在血清中，后者存在于黏膜表面及分泌液中，是黏膜局部抗感染的重要因素。IgM：是分子量最大，體內(nèi)受感染后最早產(chǎn)生的抗體，具有很強的激活補體和調(diào)理作用，因此是重要的抗感染因子，且常用于診

細胞凋亡實驗原理是什么？2025/03/11

細胞凋亡是細胞的一種基本生物學(xué)現(xiàn)象，在多細胞生物去除不需要的或異常的細胞中起著必要的作用。它在生物體的進化、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定以及多個系統(tǒng)的發(fā)育中起著重要的作用。細胞凋亡不僅是一種特殊的細胞死亡類型，而且具有重要的生物學(xué)意義及復(fù)雜的分子生物學(xué)機制。細胞凋亡實驗原理：1、細胞死亡根據(jù)其性質(zhì)、起源及生物學(xué)意義區(qū)分為凋亡和壞死兩種不同類型。凋亡普遍存在于生命界，在生物個體和生存中起著非常重要的作用。它是細胞在一定生理條件下一系列順序發(fā)生事件的組合，是細胞遵循一定規(guī)律自己結(jié)束生命的自主控制過程。細胞凋亡具有可

實驗室試劑貯存應(yīng)注意什么？2025/03/03

實驗室試劑貯存應(yīng)注意點：一、避光其實在實驗室中很多化學(xué)試劑見強光都極易揮發(fā)變質(zhì)，所以為避免試劑受到光的輻射，應(yīng)采用棕色玻璃瓶，外用黑紙包裹，并貯藏于暗室或遮光的試劑柜中。避光保存適用于能進行光化學(xué)反應(yīng)的試劑，如胺類、酚類、醛類等。二、低溫為了使試劑保持足夠低的溫度。采用水箱保存。低溫貯藏適用于容易失去的生化試劑和容易分解的物質(zhì)。如標準血清應(yīng)貯藏于±4℃的水箱中，而羧肽酶B和羧肽酶Y則應(yīng)貯藏于-20℃的低溫水箱。普通試劑應(yīng)貯藏于溫度較差的陰涼處所。另外勁馬公司主營的ELISA試劑盒的保存應(yīng)在2-8

ELISA試劑盒包被用抗原解析2025/02/24

ELISA試劑盒包被用抗原解析：用于包被固相載體的抗原按其來源不同可分為天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原三大類。天然抗原可取自動物組織、微生物培養(yǎng)物等，須經(jīng)提取純化才能作包被用。如HBsAg可以從攜帶者的血清中提取，一般的細菌和病毒抗原可以從其培養(yǎng)物中提取，蛋白成份抗原可從富含此抗原的材料中提取等（例如AFP從臍帶血或胎肝中提取）。重組抗原是抗原基因在質(zhì)粒體中表達的蛋白質(zhì)抗原，多以大腸桿菌或酵母菌為質(zhì)粒體。重組抗原的優(yōu)點是除工程菌成份外，其他雜質(zhì)少，而且無傳染性，但純化技術(shù)難度較大。以大腸桿菌為

微生物培養(yǎng)基配置一般過程2025/02/17

培養(yǎng)基(culturemedium)是人工配制的，適合微生物生長、分離鑒別的營養(yǎng)基礎(chǔ)。一般基礎(chǔ)培養(yǎng)基中古有蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉、氯化鈉、瓊脂等基本營養(yǎng)物質(zhì)。微生物培養(yǎng)基應(yīng)用范圍很廣。例如，無菌試驗培養(yǎng)基可檢查藥品、生物制品是否污染細菌，它直接關(guān)系到人民用藥安全；在臨床及食品衛(wèi)生檢驗中常用選擇、鑒別培養(yǎng)基，此類培養(yǎng)基中根據(jù)用途不同，需要加入抑菌劑、指示劑、血液、糖等試劑，以利于特定細菌的分離與鑒別，需要使細菌大量生長、繁殖的各類培養(yǎng)基；病毒培養(yǎng)及疫苗中則需用組織細胞培養(yǎng)液，主要成分為多種氨基