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豬細小病毒PCR試劑盒試驗操作流程2023/12/04

豬細小病毒PCR試劑盒試驗操作流程:1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板

緩沖液的PH要大于包被蛋白的PI原因2023/11/28

為什么緩沖液的PH大于蛋白的PI包被效果好呢，跟蛋白的帶電荷情況有沒有關系，蛋白和聚苯乙烯板子結合的詳細過程目前上不是很明了，目前認為是通過靜電吸附在板子上的，而聚苯乙烯板子一般在出廠前也要經過強電廠處理以提高吸附能力！肯定和蛋白的帶電情況有關，包被緩沖液并不一定都是PH9.6的CB，不同的蛋白選用不同的包被緩沖液可以得最佳的包被效果，從上面可以看出和蛋白的帶電情況有明顯的相關性！為什么緩沖液的PH要大于包被蛋白的PI，原因有兩點：一是因為蛋白質與酶標板的結合主要是靠疏水作用的物理吸附。而緩沖液

矮棒曲霉低溫存法與保藏方法2023/11/20

低溫存法：①簡單保存法，將瓊脂斜面孢子培養物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養物置于4℃冰箱保存,保存時間不超過1～2個月，若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時間可達3～4個月；②液氮超低溫保存法，將生長穩定期的細胞懸浮在10%甘油或其他低冰點液體中，密封于安瓿管內，然后控制冷卻速度，使安瓿管溫度逐步下降至-35℃時，即可置于-150～-196℃的液氮罐中保存。大多數微生物如病毒、噬菌體、多種細菌、放線菌、酵母和原蟲、特別是一些用冷凍

免疫共沉淀(Co-IP)優缺點詳述2023/11/13

以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法，是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。其原理是：當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質X的抗體免疫沉淀X，那么與X在體內結合的蛋白質Y也能沉淀下來。目前多用精制的proreinA預先結合固化在argarose的beads上，使之與含有抗原的溶液及抗體反應后，beads上的proreinA就能吸附抗原達到精制的目的。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質是

人ELISA檢測試劑盒操作步驟2023/11/06

人ELISA檢測試劑盒操作步驟：1.取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置30分鐘。2.分組：取出96孔板，根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數，把剩余的板條繼續冷藏處理。分別設標準品組（6個濃度）、空白孔、待測樣品組。注：為減少實驗誤差，保證準確性，建議設置復孔。3.加樣：依照標準品的順序分別加入50ul的標準品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入50ul的蒸餾水；其余微孔中加入50ul的待測樣本。4.加酶標溶液：標準品組、待測樣本組各孔中加入100ul的酶標溶液（空白對照孔除外）。5.

菌種的培養具體分析2023/10/30

菌種的培養具體分析：1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）三級。工業發酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復篩。2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經過擴大培養成為具有一定數量和質量的純菌種的制備過程。以作接入發酵罐中進一步擴大菌體量及合成產物之用。3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。4、保存在沙土管或冷凍管中的菌種，用無菌手續挑取少許，接入瓊脂斜面培養基上，在25℃（或較高溫

鏈球菌B族PCR檢測試劑盒實驗?PCR反應特點2023/10/23

鏈球菌B族PCR檢測試劑盒實驗PCR反應特點：1、特異性強PCR反應的特異性決定因素為：①引物與模板DNA特異正確的結合；②堿基配對原則；③TaqDNA聚合酶合成反應的忠實性；④靶基因的特異性與保守性。其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及TaqDNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行，結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區，其特

開菲爾乳桿菌保藏方法2023/10/17

開菲爾乳桿菌保藏方法：1.傳代培養保藏法又有斜面培養、穿刺培養、皰肉培養基培養等（后者作保藏厭氧細菌用），培養后于4-6℃冰箱內保存。2.液體石蠟覆蓋保藏法是傳代培養的變相方法，能夠適當延長保藏時間，它是在斜面培養物和穿刺培養物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養基水分蒸發而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進入，以減弱代謝作用。3.載體保藏法是將微生物吸附在適當的載體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應用相當廣泛。4.寄主保藏法用于目前尚不能在人

抗原抗體反應影響因素詳述2023/10/08

一、反應物自身的因素1.抗體：不同來源的抗體，反應性各有差異，抗體的濃度、特異性和親和力都影響抗體抗原反應，為提高試驗的可靠性，應選擇高特異性、高親和力的抗體作診斷試劑。等價帶的寬窄也影響抗原抗體復合物的形成，單克隆抗體不適用于沉淀反應。2.抗原：抗原的理化性狀、分子量、抗原決定簇的種類及數目均可影響反應結果。顆粒性抗原出現凝集反應，可溶性抗原出現沉淀反應，單價抗原與相應抗體結合不出現沉淀現象。二、反應環境條件1.電解質：抗原與抗體發生特異性結合后，雖由親水膠體變為疏水膠體，若溶液中無電解質參加

抗體的免疫學功能了解一下2023/10/03

抗體的免疫學功能如下：1、中和（Neutralization）這是抗體最基本的功能?？贵w的中和指的是抗體和抗原結合后，抗原失去原有的功能。比如病毒的糖蛋白無法和細胞受體結合，酶無法進行催化，轉運蛋白無法轉運等等。中和是抗體自身的功能，僅由抗體的分子結構決定，不需要免疫系統的其它部分參與。2、凝集（Agglutination）抗原和抗體結合后會凝集成一團，失去行動力，有利于免疫系統的清除。3、調理（Opsonization）?？贵w和抗原結合會促進吞噬細胞對抗原的吞噬。由于細胞膜帶負電會互相排斥，被

小鼠ELISA試劑盒實驗中各項條件選擇2023/09/25

在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:1、固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。2、包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一

ELISA實驗擴增產物在凝膠中異常分述2023/09/18

ELISA實驗擴增產物在凝膠中涂布或成片狀條帶彌散異常分述：1、酶量過高。減少酶量；酶的質量差，調換另一來源的酶。2、dNTP濃度過高。減少dNTP的濃度。3、MgCl2濃度過高。可適當降低其用量。4、模板量過多。質粒DNA的用量應5、引物濃度不夠優化。對引物進行梯度稀釋重復PCR反應。6、循環次數過多；增加模板量減少循環次數至30，縮短退火時間及延伸時間，或改用二種溫度的PCR循環。7、退火溫度過低。8、電泳體系有問題：①凝膠中緩沖液和電泳緩沖液濃度相差太大；②凝膠沒有凝固好；③瓊脂糖質量差。

細胞衰老檢測方法與步驟2023/09/11

細胞衰老檢測方法與步驟:1、細胞接種前在6孔培養板中預先放置滅菌的細胞片，每孔加入1×10E5個細胞，37℃5%CO2條件下培養過夜，使細胞在細胞片上生長。2、在超凈工作臺中吸棄6孔培養板中的培養液，加入×1PBS，洗滌細胞1次，隨后加入2%甲醛/0.2%戊二醛固定液，室溫條件下固定3~5分鐘。3、吸棄2%甲醛/0.2%戊二醛固定液，加入×1PBS，洗滌細胞3次，每次3分鐘。4、吸棄×1PBS，加X-Gal溶液以浸沒細胞片為宜，37℃孵育4~8小時或過夜，用保鮮膜包被6孔培養板以防染液蒸發。5、

PCR熒光化學物質原理簡述2023/09/08

實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為兩種：熒光探針和熒光染料。現將其原理簡述如下：1、TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物形成wa

一抗選擇重點需確定的五點2023/08/28

一抗選擇重點需確定的五點:1、確定抗體的名字。注意中英文名字、它名、亞型等信息。2、確定你的實驗類型。Elisa，WB，IHC，ICC，還是FACS。一般抗體的說明書都會列出該抗體經驗證過適用于何種實驗的類型，如果抗體說明書沒有提及的應用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應用類型，而僅是說明尚未經過此種實驗驗證，請根據說明書列出的已驗證的類型來選擇適合你實驗的抗體。3、確定實驗樣本的種屬。Human，Mouse，還是Rat。一般抗體說明書都列出該抗體經試驗驗證過適用于何種物種實驗，請根據說明

貼壁細胞及懸浮細胞收到后處理2023/08/21

細胞處理方法具體操作需要根據到貨時細胞密度，細胞生長狀態等具體情況，酌情處理。一．貼壁細胞客戶接收到細胞，用75%的酒精消毒（建議配制75%酒精的水是滅菌過的）培養瓶外部。肉眼觀察細胞培養基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。顯微鏡觀察細胞，當細胞融匯至80%左右（可以傳代的情況下），細胞應該在37度培養箱預溫1-2h后再做處理。如未達到細胞傳代密度，培養瓶應預留一部分培養基繼續培養。嚴格無菌操作，

化學品性質不相同處理2023/08/17

化學品性質不相同處理：1.低沸點的化合物、需要低溫保存的藥品須按要求放入所需的環境（低溫冰箱）；2.避光保存的藥品及其所配制的試劑，均應按要求用棕色容器（瓶）保存，或用深色紙包裹。3.藥品一律放入化學品安全柜內，不得與配制的溶液混在一起放置；4.液體藥品放置矮柜，固體藥品與液體藥品分開放置；5.酸堿不能混放，氧化劑和還原劑不能混放，如果混合會發生劇烈反應的試劑不混放，防止可能因為傾倒，破碎等意外原因引發事故；6.對于一些常溫環境下存放的藥品，一定要注意防潮，否則會發生固體結塊現象7.液體樣品結塊

生化試劑性能指標分解2023/08/07

生化試劑根據用途不同對其純度及技能均有必定的要求。例如酶試劑，有粗制酶、結晶酶、屢次結晶酶以及不含某些雜酶的酶制劑等多種。生化試劑主要性能指標：1.穩定性：指在規則條件下經過一段時間的保存，仍能達到相應的性能指標。如試劑空白吸光度、線性范圍、靈敏度等。2.反響靈敏度：指單位濃度(或活性)的測定物反響所發生的反響度，反響度越高，靈敏度越大。3.精密度：成果間彼此契合的一致程度。4.準確度：與參考測定程序成果的一致性。5.線性范圍：在規則的重復性和線性偏差下，測得的濃度或活性值與設定的濃度或活性值之

抗原特性詳解2023/08/01

抗原的特性：根據抗原的概念可以看出抗原有兩種特性。1、免疫原性（immunogenicity）即抗原刺激機體免疫系統產生免疫應答的過程。該過程包括：抗原進入機體后，刺激淋巴細胞活化、增殖、分化，產生抗體或致敏的效應淋巴細胞。2、反應原性（reactogenicity）即抗原與相應抗體或致敏的效應T細胞發生特異性反應的性能，又稱免疫反應性（immunoreactivity）。同時具有這兩種性能的物質稱為wan全抗原（completeangigen），一般說的抗原即wan全抗原，如細菌、病毒、異種動

ELISA正確的洗板技術注意事項2023/07/17

正確的洗滌和沖洗方案尤其重要。在下游分析過程中，不充分、不一致和/或過度清洗會造成問題。有許多洗板的方法，包括使用自動洗板機、手動分流器或洗瓶。當手動吸出孔中的液體時，要注意不要碰到孔的底部--吸管的jian端應該放在孔的一側。為了減少背景信號，清洗量需要足夠大，以去除孔中未結合的樣品和試劑。然而，過度洗滌會減少目標信號。確保所有的孔都被平均清洗，以避免在整個檢測板上引入信號變化。要做到這一點，如果是手工清洗，請檢查移液器吸頭是否固定好，如果使用自動洗板機，所有分配和吸液的噴頭必須沒有堵塞。你可