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ELISA實驗內(nèi)源性干擾物質(zhì)分述2025/07/17

ELISA實驗，有人認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig(s)抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。（1）類風(fēng)濕因子人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子（RF）可以與ELISA系統(tǒng)中的捕捉抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合，從而導(dǎo)致假陽性。解決該情況的辦法是：①用F(ab)2替代完整的IgG；②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性（63℃，10min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀

ELISA實驗檢測陽性對照（品）是什么？2025/07/08

ELISA實驗檢測陽性對照（品）：1、陽性對照（品）的概念與要求：同陰性對照（品），只是采用“精選"的含有待檢物質(zhì)的人血清制備而成。所謂“精選"，就是把收集的陽性人血清經(jīng)過數(shù)種試驗進行“篩試"、把含有“干擾性物質(zhì)"的血清剔除、不用，以避免出現(xiàn)“假陽性"干擾試驗結(jié)果。2、陽性對照（品）設(shè)置，也可區(qū)分為兩種類型與用途：一是陽性對照主要用于評價該項試驗結(jié)果是否有效和試驗結(jié)果的穩(wěn)定性與可比性。而所設(shè)的陽性對照的測量值不列入Cutoff值計算、但是不可不做。如HBsAg、抗—HBs、HBeAg等。二是陽性

免疫組化抗體選擇流程2025/07/01

選擇免疫組化抗體時，需要考慮多個關(guān)鍵因素以確保實驗的準(zhǔn)確性和特異性。以下是一步一步的流程：1.確定目標(biāo)蛋白：明確您想要檢測的蛋白名稱，包括中英文名字、別名等信息。檢查目標(biāo)蛋白的同分異構(gòu)體、功能域、加工形式以及可能的翻譯后修飾，以確保選擇的抗體能識別您的特定目標(biāo)。2.確認(rèn)抗體特異性：驗證抗體說明書中的UniProtID是否與您的目標(biāo)蛋白一致，避免同源蛋白的交叉反應(yīng)。使用NCBIBLAST工具分析目標(biāo)蛋白序列，確認(rèn)抗體不會與相似序列的其他蛋白質(zhì)發(fā)生非特異性結(jié)合。3.選擇一抗類型：單克隆抗體（mAb）

原代細(xì)胞的提取操作過程2025/06/24

原代細(xì)胞的提取的整個操作過程：1.整個操作要在潔凈通風(fēng)的超凈臺下進行，所有的器件要高壓消毒。2.依據(jù)BALB/c小鼠的體重，用10ml/kg3%濃度的麻醉；將小鼠置于盛有75%乙醇的燒杯內(nèi)，這一步不只能夠消毒，也能夠讓小鼠體毛浸濕，后續(xù)剃去皮毛的時分不會沾到剪刀或安排上。3.用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟，裝有PBS的注射器刺進心尖，同時在右心耳處剪開一個小口，緩慢推進注射器，隨著心臟的跳動，將體內(nèi)的血液沖洗出來。4.取出小鼠的肺部安排，將肺安排切成小米粒樣的巨細(xì)，置于預(yù)冷的HBSS中反復(fù)沖洗幾回。5

細(xì)胞凍存實驗步驟2025/06/16

細(xì)胞凍存實驗步驟：1.制備凍存液，凍存液比例：本實驗室采用70%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO，不同實驗室及不同細(xì)胞可能略有差異，也可采用55%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO；2.取形態(tài)良好，處于對數(shù)生長期的細(xì)胞，對其消化、離心(1500rpm離心8min)、計數(shù)；3.根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入對應(yīng)的凍存液，使細(xì)胞密度維持在300-500w/mL；4.小心用鑷子打開凍存管管蓋，每管分裝1-1.5mL含細(xì)胞的凍存液，擰緊蓋管，做好標(biāo)記。5.分裝好的凍存管轉(zhuǎn)入程序降溫盒后直接放-80℃過夜；

PCR反應(yīng)電泳后一般常見的幾種條帶2025/06/09

PCR擴增后一般進行瓊脂糖凝膠電泳分析，電泳后一般有以下幾種條帶：1、引物帶。引物濃度過高或是擴增效率不是特別高時都會有，一般不呈現(xiàn)為細(xì)帶，為發(fā)散狀；如果目的擴增產(chǎn)物帶和引物帶都很亮，可以考慮適當(dāng)降低引物量。2、引物二聚體帶。比引物跑得慢一點，條帶清晰，但如果擴增產(chǎn)物小于100bp時，產(chǎn)物與引物二聚體就不好分別了，建議采用DNA聚丙烯酰胺電泳（不是蛋白質(zhì)的SDS聚丙烯酰胺電泳）；如果引物二聚體在優(yōu)化復(fù)性溫度后仍然嚴(yán)重影響目的產(chǎn)物的擴增，優(yōu)先考慮更換引物設(shè)計（因為引物合成的成本比反復(fù)優(yōu)化條件的成本

ELISA試劑盒試驗血清和血漿收集處理2025/06/04

1、血清血清是zui常用于ELISA檢測的一類樣本，處理也比較簡單。用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本，將試管或離心管室溫放置2小時或4℃過夜，使血清析出。（最好將試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的析出。）4℃1000×g離心20分鐘，仔細(xì)收集上清。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。采血過程中應(yīng)避免溶血，因為紅細(xì)胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質(zhì)，在以HRP為標(biāo)記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色，而導(dǎo)致檢測的不準(zhǔn)確性。同時也應(yīng)避免細(xì)

血清不穩(wěn)定劣勢具體分析2025/05/27

血清最大的劣勢就是不穩(wěn)定，不穩(wěn)定原因如下：1、來源不穩(wěn)定以胎牛血清為例，懷孕母牛在屠宰前腹部被剖開，取出胎牛，在低溫?zé)o菌條件下，刺破胎牛的心臟以獲取血清。就這一條，動物倫理組織就可以把你攔住嘮嘮。另外，牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家，我國在對牛血清的質(zhì)量《中國生物制品主要原輔料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)2000》中提出比較嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)要求，包括蛋白質(zhì)含量，細(xì)菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細(xì)菌內(nèi)毒素，細(xì)胞增殖支持等檢查。2、組分不穩(wěn)定還有最讓人鬧心的，動物血清成分復(fù)雜，其組分及含量常和

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點有哪些？2025/05/19

細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)是在細(xì)胞房中進行，在超凈工作臺或生物安全柜中，把細(xì)胞處理好，根據(jù)需要加入細(xì)胞培養(yǎng)基，放入細(xì)胞培養(yǎng)瓶/皿或細(xì)胞培養(yǎng)板中，再放到帶有5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：1.研究的對象是活細(xì)胞在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。2.研究條件可以人為控制pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行

細(xì)胞周期操作步驟2025/05/14

細(xì)胞周期指細(xì)胞一個世代所經(jīng)歷的時間。從一次細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束為一個周期。細(xì)胞周期反應(yīng)了細(xì)胞增殖速度。操作步驟：1、細(xì)胞生長至指數(shù)期時，向培養(yǎng)液中加入BrdU，使終濃度為10μg/ml。2、44小時加秋水仙素，使每ml中含0.1μg。3、48小時后常規(guī)消化細(xì)胞至離心管中，注意培養(yǎng)上清的漂浮細(xì)胞也要收集到離心管中。4、常規(guī)染色體制片（見第三部分：染色體技術(shù)）。5、染色體玻片置56℃水浴鍋蓋上，鋪上2×SSC液，距紫外燈管6cm處紫外照射30分鐘。6、棄去2×SSC液，流水沖洗。7、Giem

PCR反應(yīng)技術(shù)主要特點2025/05/06

PCR反應(yīng)在生物體外大量擴增特定DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，其特點是可以以微量的DNA為模板，快速擴增得到大量拷貝。PCR反應(yīng)特點：1.特異性強。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及TaqDNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合（復(fù)性）可以在較高的溫度下進行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。2.靈敏度高。PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克（pg=10

實時熒光定量PCR技術(shù)實驗操作步驟2025/04/27

實時熒光定量PCR技術(shù)實驗操作步驟：1、RNA提?。横槍ηo環(huán)狀結(jié)構(gòu)RT引物，RNA正常提取就好;對于Oligod(T)特異的RT引物，盡量用特殊試劑盒提取miRNA。2、反轉(zhuǎn)錄：反轉(zhuǎn)錄過程對酶沒有特殊要求，操作按照反轉(zhuǎn)錄酶的說明書進行。對于引物，在反轉(zhuǎn)錄過程中只需加入Oligod(T)特異的RT引物或莖環(huán)狀結(jié)構(gòu)RT引物，不需要另外添加其他RT引物。用Oligod(T)特異的RT引物時，RNA需要進行3'Poly(A)加尾處理。內(nèi)參基因不需要單獨設(shè)計RT引物，可以用熒光定量PCR的反向引物作為RT

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的管理事項2025/04/21

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的管理事項:（一）規(guī)范記錄：建立標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)臺帳，定期更新臺賬，明確責(zé)任主體，以便做到可以追本溯源；領(lǐng)用時，記錄好領(lǐng)用時的名稱、數(shù)量、時間、領(lǐng)用人、發(fā)放人等必要的信息；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)在有效期內(nèi)使用，應(yīng)定期檢查標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的有效期，對于超限的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)要填寫銷毀登記表；建立標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)檔案。（二）定期核查：對于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的種類、級別、介質(zhì)、濃度含量、有效期、批號、環(huán)境條件、儲存方法、帳物相符等等各參數(shù)，要定期核查。定期檢查實驗室各檢測項目所對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是否相符。對新增檢測項目所對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)及時納入規(guī)范管

影響ELISA試劑盒變質(zhì)因素詳細(xì)分析2025/04/15

ELISA試劑盒變質(zhì)是ELISA實驗中比較常見的問題，那么，ELISA試劑盒變質(zhì)影響ELISA試劑盒質(zhì)保。一旦變質(zhì)會有什么影響呢？現(xiàn)為大家詳細(xì)分析下。1、試劑因素不同批次的ELISA試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量全一致，即使是通過批批檢的項目其檢測結(jié)果也存在差異，因此必須選擇和訂購長批號的試劑，并保證保存條件。嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評估試劑的復(fù)雜過程，并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性；對于效期短、使用率低的試劑，應(yīng)當(dāng)小量分裝，每次使用則取分裝部分即可，避免反復(fù)凍融造

細(xì)胞周期測定同位素標(biāo)記法方法分析2025/04/07

同位素標(biāo)記法測定細(xì)胞周期：標(biāo)記有絲分裂百分率法(PLM)是一種常用的測定細(xì)胞周期時間的方法。其原理是對測定細(xì)胞進行脈沖標(biāo)記、定時取材、利用放射自顯影技術(shù)顯示標(biāo)記細(xì)胞，通過統(tǒng)計標(biāo)記有絲分裂細(xì)胞百分?jǐn)?shù)的辦法來測定細(xì)胞周期。測定原理：①待測細(xì)胞經(jīng)3H-胸腺嘧啶核苷標(biāo)記后，所有S期細(xì)胞均被標(biāo)記。②S期細(xì)胞經(jīng)G2期才進入M期，所以一段時間內(nèi)PLM=0。③開始出現(xiàn)標(biāo)記M期細(xì)胞時，表示處于S期最后階段的細(xì)胞，已渡過G2期，所以從PLM=0到出現(xiàn)PLM的時間間隔為G2期的持續(xù)時間。④S期細(xì)胞逐漸進入M期，PLM

細(xì)胞復(fù)蘇操作流程2025/03/31

細(xì)胞復(fù)蘇是指將凍存在液氮里邊或者-80℃冰箱中的細(xì)胞解凍，再培養(yǎng)傳代。細(xì)胞復(fù)蘇應(yīng)采用快速融化的方法，這樣的目的是為了讓細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)融化，從而避免慢悠悠的融化，使得水分滲入細(xì)胞內(nèi)再結(jié)晶，從而對細(xì)胞再次造成傷害，從而影響細(xì)胞的存活率。細(xì)胞復(fù)蘇操作流程：1：細(xì)胞是凍在-80℃的環(huán)境里面的，所以拿出來后，應(yīng)該盡快去37℃水浴鍋里解凍（我一般是放在PE手套里面，然后在37攝氏度的水域上快速融化。）這一步的操作不要超過一分鐘！2：用預(yù)熱的培養(yǎng)基稀釋凍存的細(xì)胞（這步我會把融化的凍存液加入到15ml

聚合酶鏈PCR反應(yīng)技術(shù)的特點集合2025/03/24

聚合酶鏈PCR反應(yīng)技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。聚合酶鏈PCR反應(yīng)技術(shù)的特點集合如下：1、特異性強決定PCR反應(yīng)特異性的因素有:①引物與模板DNA特異分子的正確結(jié)合;②堿基配對原則;③TaqDNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;④靶基因的特異性與保守性。其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵,它取決于所設(shè)計引物的特異性及退火溫度。在引物確定的條件下,PCR退火溫度越高,擴增的特異性越好。TaqDNA聚合酶的耐高溫性質(zhì)使反應(yīng)中引物能在較高的溫度下與模板退火

熒光定量PCR試劑盒使用范圍2025/03/17

熒光定量PCR試劑盒使用范圍：1、核酸定量分析:對傳染性疾病進行定量定性分析，病原微生物或病毒含量的檢測,比如近期流行的甲型H1N1流感，轉(zhuǎn)基因動植物基因拷貝數(shù)的檢測，RNAi基因失活率的檢測等。2、基因表達(dá)差異分析:比較經(jīng)過不同處理樣本之間特定基因的表達(dá)差異(如藥物處理、物理處理、化學(xué)處理等)，特定基因在不同時相的表達(dá)差異以及cDNA芯片或差顯結(jié)果的確證3、SNP檢測:檢測單核苷酸多態(tài)性對于研究個體對不同疾病的易感性或者個體對特定藥物的不同反應(yīng)有著重要的意義，因分子信標(biāo)結(jié)構(gòu)的巧妙性，一旦SNP

熒光定量PCR實驗內(nèi)標(biāo)（IC）簡述2025/03/11

熒光定量PCR實驗內(nèi)標(biāo)（InternalControl，IC）是指在同一反應(yīng)管中與靶序列共同擴增的一段非靶序列分子。內(nèi)標(biāo)有兩種形式，一種是使用天然樣品中含有的內(nèi)參基因作為內(nèi)標(biāo)，另一種是人工添加的內(nèi)標(biāo)。內(nèi)標(biāo)的最大特點是與靶序列共同擴增，而其他的對照都是獨立擴增。1、內(nèi)參基因通常它們在各組織和細(xì)胞中的表達(dá)相對恒定，在檢測基因的表達(dá)水平變化時常用它來做參照物。內(nèi)參基因通常是持家基因（house-keepinggene）因為其表達(dá)水平受環(huán)境因素影響較小，而且在個體各個生長階段的幾乎全部組織中持續(xù)表達(dá)變化

穩(wěn)定性好的抗體具有的特點是什么？2025/03/03

抗體（antibody，Ab）是機體在體內(nèi)存在的外來分子、微生物等抗原物質(zhì)刺激下，由B淋巴細(xì)胞或記憶細(xì)胞增殖分化成的漿細(xì)胞所產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白（immunoglobulins，Ig），主要分布在血清中，也分布于組織液及外分泌液中。抗體在室溫、37℃保存與-20℃保存具有一樣的活性與穩(wěn)定性。穩(wěn)定性好的抗體具有的特點：1.抗體純度高純度的抗體產(chǎn)品，去除了包括各種蛋白酶在內(nèi)的雜質(zhì)，保證了抗體的穩(wěn)定性。采用先進的抗體純化技術(shù)，確保抗體產(chǎn)品的高純度，保障其抗體產(chǎn)品的穩(wěn)定性。2.