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ATCC細(xì)胞培養(yǎng)的成功因素2017/07/20: 1.絕大部分ATCC細(xì)胞消化的時(shí)候是只要用胰酶潤洗一遍即可。吸去胰酶后，殘留的那些無法計(jì)算體積的附著在細(xì)胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2min足夠消化細(xì)胞。對于這些細(xì)胞原則上不要用胰酶孵育細(xì)胞，連續(xù)這樣傳代，對細(xì)胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去，胰酶潤洗吸去，然后37℃消化。比較難消化的細(xì)胞（潤洗方法5min還不能消化），這樣的細(xì)胞一般需要用少量胰酶孵育。2.EDTA的作用。胰酶切割ECM的一些負(fù)責(zé)粘連和附著的蛋白，而EDTA通過螯合Ca離子，作用于Integrin的活性，所以EDTA的

間質(zhì)干細(xì)胞的表面抗原和培養(yǎng)原理2017/07/18: ATCC細(xì)胞間質(zhì)干細(xì)胞的表面抗原通過流式細(xì)胞儀分析，間充質(zhì)干細(xì)胞特異性表面抗原有：SH2、SH3、CD29、CD44、CD71、CD90、CD106、CD120a、CD124。BMSC：是骨髓中除HSC以外的非造血性干細(xì)胞，骨髓中絕大多數(shù)是HSC，BMSC只占骨髓有核細(xì)胞的0.001%～0.01%。因此鑒定BMSC的方法是在骨髓的干細(xì)胞中排除HSC——BMSC：CD45-、CD34-、CD29+、CD14+/HSC：CD34+。間質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)原理概述間質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymalstemc

人正常組織細(xì)胞微載體培養(yǎng)技術(shù)2017/07/13: 一、人正常組織細(xì)胞微載體培養(yǎng)應(yīng)用此技術(shù)于1967年被用于動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)。經(jīng)過三十余年的發(fā)展，該技術(shù)目前已漸日趨完善和成熟，并廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)疫苗、基因工程產(chǎn)品等。微載體培養(yǎng)是目前*的Z有發(fā)展前途的一種動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)，其兼具懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)，放大容易。目前微載體培養(yǎng)廣泛用于培養(yǎng)各種類型細(xì)胞，生產(chǎn)疫苗、蛋白質(zhì)產(chǎn)品，如293細(xì)胞、成肌細(xì)胞、Vero細(xì)胞、CHO細(xì)胞。使用較多的反應(yīng)器有兩種：貝朗公司的BIOSTAT?B反應(yīng)器，使用雙槳葉無氣泡通氣攪拌系統(tǒng)；NBS公司的CelliGen、

人正常組織細(xì)胞排除法2017/07/11: 1、人正常組織細(xì)胞機(jī)械刮除法：是用不銹鋼絲末端插有橡膠刮頭（用膠塞剪成三角形插以不銹鋼絲）、或裹少許脫脂棉制成，裝入試管中高壓滅菌后備用（也可用特制電熱燒灼器刮除）。刮除程序?yàn)椋海?）標(biāo)記：鏡下觀察，用不脫色筆在培養(yǎng)瓶皿的背面圈下生長腫瘤細(xì)胞的部位；（2）刮除：棄掉培養(yǎng)液，把無菌膠刮伸入瓶皿中，肉眼或顯微鏡窺視下，刮除無標(biāo)記空間；（3）用Hanks液沖洗一兩次，洗除被刮掉的細(xì)胞；（4）注入培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)仍有成纖維細(xì)胞殘留，可重復(fù)刮除至*除掉為止2、反復(fù)貼壁法：根據(jù)腫瘤細(xì)胞比成纖維細(xì)胞貼壁

細(xì)胞培養(yǎng)對溫度的需求2017/07/06: 維持培養(yǎng)原代細(xì)胞旺盛生長,必須有恒定而適宜的溫度.不同種類的細(xì)胞對培養(yǎng)溫度要求也不同.人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.5℃±0.5℃,偏離這一溫度范圍,細(xì)胞的正常代謝會(huì)受到影響,甚至死亡.培養(yǎng)細(xì)胞對低溫的耐受力較對高溫強(qiáng),溫度上升不超過39℃時(shí),細(xì)胞代謝與溫度成正比;人體細(xì)胞在39-40℃1小時(shí),即能受到一定損傷,但仍有可能恢復(fù);在40-41℃1小時(shí),細(xì)胞會(huì)普遍受到損傷,僅小半數(shù)有可能恢復(fù);41-42℃1小時(shí),細(xì)胞受到嚴(yán)重?fù)p傷,大部分細(xì)胞死亡,個(gè)別細(xì)胞仍有恢復(fù)可能;當(dāng)溫度在43℃以上1小時(shí),細(xì)胞全

ATCC細(xì)胞傳代培養(yǎng)的方法2017/07/04: 1ATCC細(xì)胞觀察培養(yǎng)基是否正常，細(xì)胞狀態(tài)如何，細(xì)胞密度如何，決定是否傳代。觀察時(shí)擰緊蓋子。2.加熱PBS、versene、培養(yǎng)基，(提前做好)瓶子不要倒著放，不要讓液體接觸到瓶塞。3.打開超凈臺(先開風(fēng)機(jī)，后開照明)，用75%乙醇清潔臺面，點(diǎn)燃酒精燈。不要把廢液缸拿出去倒，如果廢液太多，可以用其他容器先裝廢液。取小離心管一個(gè)，置于架子上。4.取尖吸管、吸量管各一支，放置在的架上。放置的方式，注意吸管、吸量管前端都不要與架子接觸。5.取待傳代的細(xì)胞。打開versene，用酒精燈外焰燒。燒吸管時(shí)距

細(xì)胞增殖生長狀態(tài)2017/06/29: 人正常組織細(xì)胞初代或傳代培養(yǎng)時(shí)，都有一長短不同的潛伏期。傳代細(xì)胞系、胚胎組織或幼體組織潛伏期短，一般在第二天即可見細(xì)胞生長，一周內(nèi)便可連接成片。成體組織的潛伏期長，老齡組織和癌組織更長，有時(shí)可達(dá)一周左右。初代組織塊培養(yǎng)法細(xì)胞生長，Z先從組織“長”出的為游走細(xì)胞，它們多單獨(dú)活動(dòng)，形態(tài)不規(guī)則，用縮時(shí)逐格顯微攝電影法可顯示出極活躍的變形、游走和吞噬活動(dòng)。在游走細(xì)胞之后，接著長出的是成纖維細(xì)胞或上皮細(xì)胞。只有當(dāng)出現(xiàn)細(xì)胞分裂、細(xì)胞數(shù)量逐漸增多、形成較大生長暈或連接成片時(shí)，細(xì)胞才真正進(jìn)入增殖狀態(tài)。成纖維細(xì)胞

ATCC細(xì)胞傳代標(biāo)準(zhǔn)2017/06/27: ATCC細(xì)胞傳代時(shí)間一般通過兩個(gè)方面進(jìn)行確定：一是在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，當(dāng)培養(yǎng)液由于pH值下降而呈現(xiàn)黃色時(shí)，表明細(xì)胞已經(jīng)達(dá)到Z大密度，需要換液或進(jìn)行傳代培養(yǎng)；二是觀察細(xì)胞形態(tài)，健康細(xì)胞形態(tài)飽滿，折光性好，生長致密時(shí)即可傳代。初代培養(yǎng)的傳代很重要，是建立細(xì)胞系的關(guān)鍵時(shí)期。在傳代時(shí)一般要特別注意以下3點(diǎn)：①ATCC細(xì)胞沒有生長到足以覆蓋瓶底壁的大部分表面之前，不要急于傳代。②原代培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞多為混雜生長，上皮樣細(xì)胞和成纖維樣細(xì)胞并存的情況很常見。傳代時(shí)不同的細(xì)胞有不同的消化時(shí)間，因此要根據(jù)需要，注意觀察及

原代細(xì)胞測定周期的方法2017/06/22: 一、原理原代細(xì)胞周期指細(xì)胞一個(gè)世代所經(jīng)歷的時(shí)間。從一次細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束為一個(gè)周期。細(xì)胞周期反應(yīng)了細(xì)胞增殖速度。單個(gè)細(xì)胞的周期測定可采用縮時(shí)攝影的方法，但它不能代表細(xì)胞群體的周期，故現(xiàn)多采用其他方法測群體周期。測定細(xì)胞周期的方法很多，有同位素標(biāo)記法、細(xì)胞計(jì)數(shù)法等，這里介紹一種利用BrdU滲入測定細(xì)胞周期的方法。BrdU（5-溴脫氧尿嘧啶核苷）加入培養(yǎng)基后，可做為細(xì)胞DNA復(fù)制的原料，經(jīng)過兩個(gè)細(xì)胞周期后，細(xì)胞中兩條單鏈均含BrdU的DNA將占l/2，反映在染色體上應(yīng)表現(xiàn)為一條單體淺染。如

分析人正常組織細(xì)胞培養(yǎng)中的試劑2017/06/20: 一、人正常組織細(xì)胞的紡錘體阻斷劑（Spindleinhibitor）在有絲分裂過程中，隨著紡錘絲的形成，染色體被牽引到一起難以觀察其形態(tài)。紡錘體的形成在于細(xì)胞質(zhì)和紡錘體成分的粘度之間的平衡，因此，改變細(xì)胞質(zhì)的粘度，即可破壞紡錘體形成，從而使得染色體均勻散開，且染色體縊痕區(qū)更為清楚。在培養(yǎng)中使用的紡錘體阻斷劑為秋水仙素，在終止培養(yǎng)前加入適量秋水仙素，使正在分裂的細(xì)胞停留在中期，以獲得大量分裂相供分析之用。秋水仙素的濃度范圍比較寬，一般使用濃度0.05—0.8微克/毫升，在終止培養(yǎng)前處理2—4小時(shí)。

細(xì)胞培養(yǎng)平底和圓底（U型和V型）培養(yǎng)板的區(qū)別和選擇2017/06/15: ATCC細(xì)胞不同形狀的培養(yǎng)板有不同用途。培養(yǎng)細(xì)胞，通常是選用平底的，這樣便于鏡下觀測、有明確的底面積、細(xì)胞培養(yǎng)液面高度相對一致。因此做MTT等實(shí)驗(yàn)時(shí)，無論是貼壁和懸浮細(xì)胞，一般選用平底板。測吸光值一定要使用平底的培養(yǎng)板。要特別注意材質(zhì)，標(biāo)示"TissueCulture(TC)Treated"是養(yǎng)細(xì)胞用的。U型或V型板，一般在某些特殊要求時(shí)才使用。如在免疫學(xué)方面，當(dāng)做兩種不同淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)時(shí)，需要二者相互接觸刺激，這時(shí)一般會(huì)選用U型板，因?yàn)榧?xì)胞會(huì)由于重力的作用而聚集在很小的范圍內(nèi)內(nèi)。圓底培養(yǎng)板還

單核細(xì)胞的用途分析2017/06/13: 人正常組織細(xì)胞能吞噬異物產(chǎn)生抗體，在機(jī)體損傷治愈、抗御病原的入侵和對疾病的免疫方面起著重要的作用。機(jī)體發(fā)生炎癥或其他疾病都可引起單核細(xì)胞總數(shù)百分比發(fā)生變化，因此檢查單核細(xì)胞計(jì)數(shù)成為輔助診斷的一種重要方法。在機(jī)體的防護(hù)、免疫和創(chuàng)傷愈治過程中起協(xié)同作用。盡管它們是血液中的一類細(xì)胞成分，但它們功能的發(fā)揮，更多地體現(xiàn)在循環(huán)管道外的器官組織中。在功能方面它們與這些器官組織中的許多細(xì)胞成分如巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等密切相關(guān)。特異性免疫功能淋巴細(xì)胞也稱免疫細(xì)胞，在機(jī)體特異性免疫過程中起主要作用。所謂特

細(xì)胞株培養(yǎng)說明2017/06/08: 材料和試劑1.細(xì)胞：貼壁細(xì)胞株2.試劑：0.25％胰酶、1640培養(yǎng)基（含10％小牛血清）3.儀器和器材：倒置顯微鏡，培養(yǎng)箱、培養(yǎng)瓶、吸管、廢液缸等原理細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長，同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大，就必須進(jìn)行傳代（再培養(yǎng)）。傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過程。懸浮型細(xì)胞株直接分瓶就可以，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。初代組織塊培養(yǎng)法1.剪切：把組織小塊置于小燒杯或青霉素小瓶中，用Hanks液漂洗二三次以去掉表面

分析細(xì)胞周期同步化2017/06/06: (一)ATCC細(xì)胞自然同步化1.多核體如粘菌只進(jìn)行核分裂，而不發(fā)生胞質(zhì)分裂，形成多核體。數(shù)量眾多的核處于同一細(xì)胞質(zhì)中，進(jìn)行同步化分裂，使細(xì)胞核達(dá)108，體積達(dá)5~6cm。瘧原蟲也具有類似的情況。2.某些水生動(dòng)物的受精卵如海膽卵可以同時(shí)授精，Z初的3次細(xì)胞分裂是同步的，再如大量海參卵受精后，前9次細(xì)胞分裂都是同步化進(jìn)行的。3.增殖抑制解除后的同步分裂如真菌的休眠孢子移入適宜環(huán)境后，它們一起發(fā)芽，同步分裂。(二)人工同步化1.選擇同步化1)有絲分裂選擇法：使單層培養(yǎng)的細(xì)胞處于對數(shù)增殖期，此時(shí)分裂活躍

ATCC細(xì)胞如何選擇細(xì)胞培養(yǎng)板2017/06/01: 一、ATCC細(xì)胞培養(yǎng)板依底部形狀的不同可分為平底和圓底(U型和V型);培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6、12、24、48、96、384孔等;根據(jù)材質(zhì)的不同有Terasaki板和普通細(xì)胞培養(yǎng)板。具體選擇時(shí)根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的類型、所需培養(yǎng)體積及不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩āＦ降缀蛨A底(U型和V型)培養(yǎng)板的區(qū)別和選擇：1）貼壁細(xì)胞一般用平底培養(yǎng)板2)懸浮型細(xì)胞的培養(yǎng)一般用V型3）U型培養(yǎng)板亦多用于培養(yǎng)懸浮型細(xì)胞大部分細(xì)胞培養(yǎng)都用平底培養(yǎng)板，便于鏡下觀測、有明確的底面積、細(xì)胞培養(yǎng)液面高度相對一致，還便于MTT檢測。圓底培養(yǎng)板主要用于

測定細(xì)胞株周期的方法2017/05/25: 細(xì)胞株周期指細(xì)胞一個(gè)世代所經(jīng)歷的時(shí)間。從一次細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束為一個(gè)周期。細(xì)胞周期反應(yīng)了細(xì)胞增殖速度。單個(gè)細(xì)胞的周期測定可采用縮時(shí)攝影的方法，但它不能代表細(xì)胞群體的周期，故現(xiàn)多采用其他方法測群體周期。測定細(xì)胞周期的方法很多，有同位素標(biāo)記法、細(xì)胞計(jì)數(shù)法等.1、細(xì)胞生長至指數(shù)期時(shí)，向培養(yǎng)液中加入BrdU，使Z終濃度為10μg/ml。2、44小時(shí)加秋水仙素，使每ml中含0.1μg。3、48小時(shí)后常規(guī)消化細(xì)胞至離心管中，注意培養(yǎng)上清的漂浮細(xì)胞也要收集到離心管中。4、常規(guī)染色體制片（見第三部分：

影響人正常組織細(xì)胞因子檢測準(zhǔn)確度和特異性的因素分析2017/05/23: 影響人正常組織細(xì)胞因子檢測準(zhǔn)確度和特異性的因素有:(1)抗體:單抗的表位識別;(2)細(xì)胞因子:多種分子形式，結(jié)合蛋白復(fù)合物、抑制劑和可溶性受體復(fù)合物;(3)血漿基質(zhì):干擾抗體，異嗜性抗體和類風(fēng)濕因子;(4)標(biāo)準(zhǔn):重組參考物質(zhì)可能不顯示與樣品平行的劑量———反應(yīng)曲線。細(xì)胞因子結(jié)合蛋白已知IL-1β、TNF-α和IL-6能結(jié)合從細(xì)胞進(jìn)入血漿的可溶性受體或特異的拮抗劑。免疫分析法是否能識別這樣的結(jié)合形式幾乎是未知的，但是對TNF的研究得出了一些重要結(jié)論。但使用競爭性免疫分析法時(shí)，癌癥病人與敗血癥病人的

ATCC細(xì)胞污染處理流程2017/05/18: 1、ATCC細(xì)胞將污染的培養(yǎng)液倒掉，轉(zhuǎn)燒瓶口，加入10mlPBS，適當(dāng)晃動(dòng)清洗培養(yǎng)瓶，然后倒掉。轉(zhuǎn)燒瓶口。2、繼續(xù)加入10mlPBS，同樣方法晃動(dòng)，清洗培養(yǎng)瓶，然后倒掉。3、繼續(xù)加入5mlPBS，同樣方法洗瓶，主要是培養(yǎng)面，然后倒掉。4、重復(fù)步驟3再洗。5、重復(fù)步驟3再洗。6、加入3-5ml雙抗，洗瓶，靜置3-5分鐘，然后吸出。7、加入3ml雙抗，洗瓶，靜置3-5分鐘，然后吸出。8、再加入5mlPBS洗瓶，然后吸出。9、加入10ml培養(yǎng)液，加入2ml雙抗，放置培養(yǎng)箱培養(yǎng)，5小時(shí)之后，倒掉培養(yǎng)基，

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