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探究酶的特性實(shí)驗(yàn)材料及選擇鑒定的試劑2023/07/10
酶的特性包括酶的高效性、酶的專一性、作用條件較溫和(溫度和PH對(duì)酶的活性有影響)。常見的實(shí)驗(yàn)材料及選擇鑒定的試劑:1、H2O2:過氧化氫在FeCl3和過氧化氫酶的催化及高溫條件下分解,可通過觀察氣泡的多少體現(xiàn)反應(yīng)速率。2、淀粉:淀粉可在淀粉mei催化作用下生成麥芽糖,可用碘液檢測淀粉,以確定反應(yīng)是否結(jié)束;用斐林試劑檢測麥芽糖,以確定反應(yīng)是否開始。3、蔗糖:可在蔗糖酶的催化作用下生成葡萄糖和果糖,可用斐林試劑檢測生成物的量。4、麥芽糖:麥芽糖可以在麥芽糖酶的催化作用下生成葡萄糖,麥芽糖和葡萄糖均為
小鼠骨形成蛋白(BMPs)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)2023/06/26
小鼠骨形成蛋白(BMPs)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):1、試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。2、實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。3、不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。4、使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。5、使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。6、洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。7、
大鼠肝細(xì)胞培養(yǎng)基本條件2023/06/12
大鼠肝細(xì)胞培養(yǎng)基本條件:1、合適的細(xì)胞培養(yǎng)基合適的小鼠源細(xì)胞培養(yǎng)基是體外細(xì)胞生長增殖的重要的條件之一,培養(yǎng)基不僅提供細(xì)胞營養(yǎng)和促使細(xì)胞生長增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),而且還提供培養(yǎng)細(xì)胞生長和繁殖的生存環(huán)境。2、優(yōu)質(zhì)血清目前,大多數(shù)合成培養(yǎng)基都需要添加血清。血清是細(xì)胞培養(yǎng)液中重要的成分之一,含有細(xì)胞生長所需的多種生長因子及其它營養(yǎng)成分。3、無菌無毒細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境無菌無毒的操作環(huán)境和培養(yǎng)環(huán)境是保證細(xì)胞在體外培養(yǎng)成功的首要條件。在體外培養(yǎng)的細(xì)胞由于缺乏對(duì)微生物和有毒物的防御能力,一旦被微生物或有毒物質(zhì)污染,或者自身
貼壁細(xì)胞傳代參考2023/06/05
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4.將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新
血清購買注意點(diǎn)2023/05/29
血清的質(zhì)量,種類及使用的濃度都有可能影響細(xì)胞的生長,而不同批次的血清支持細(xì)胞生長的能力也不同,尤其是對(duì)克隆細(xì)胞的生長,某些批次血清可能含有毒性或抑制細(xì)胞生長的物質(zhì)。因此,在購買大量血清之前,必須對(duì)血清支持細(xì)胞生長能力進(jìn)行檢測,然后再大量購買質(zhì)量好的同一批號(hào)的血清,并注意以下幾點(diǎn):1、需要長期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃–70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過1個(gè)月。由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。2、一般廠商提
ELISA試驗(yàn)包被各條件選擇介紹2023/05/23
1.包被抗原的選擇包被抗原可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類。天然蛋白需經(jīng)純化才能用直接吸附法包被,對(duì)于含雜質(zhì)較多的抗原可以采用間接捕獲法包被(先用能夠與目的抗原反應(yīng)的物質(zhì)如抗體直接吸附在酶標(biāo)板上,再通過特異性反應(yīng)使抗原固相化)。經(jīng)純化的重組蛋白一般皆可直接包板。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機(jī)化合物,由于分子量太小,往往難于直接吸附在酶標(biāo)板上,一般都先使其與無關(guān)蛋白質(zhì)如BSA等偶聯(lián),偶聯(lián)物吸附于固相載體上。2.包被液的選擇一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液,如果包被的抗原在堿性條
PCR引物設(shè)計(jì)和選擇遵循原則2023/05/15
PCR反應(yīng)產(chǎn)物的特異性由一對(duì)上下游引物所決定。引物的好壞往往是PCR成敗的關(guān)鍵。引物設(shè)計(jì)和選擇目的DNA序列區(qū)域時(shí)可遵循下列原則:1、引物長度約為16-30bp,太短會(huì)降低退火溫度影響引物與模板配對(duì),從而使非特異性增高。太長則比較浪費(fèi),且難以合成。2、引物中G+C含量通常為40%-60%,可按下式粗略估計(jì)引物的解鏈溫度Tm=4(G+C)+2(A+T)。3、四種堿基應(yīng)隨機(jī)分布,在3'端不存在連續(xù)3個(gè)G或C,因這樣易導(dǎo)致錯(cuò)誤引發(fā)。4、引物3'端最好與目的序列閱讀框架中密碼子第一或第二位核苷酸對(duì)應(yīng),以
探討標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)特性2023/05/08
標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是具有一個(gè)或多個(gè)足夠均勻的特性值的物質(zhì)或材料,用以校準(zhǔn)設(shè)備、評(píng)價(jià)測量方法或給材料賦值的材料或物質(zhì),作為分析測量行業(yè)中的“量具”。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是一種材質(zhì)均勻、性能穩(wěn)定的物質(zhì),它的某個(gè)(些)化學(xué)和物理性質(zhì)(也包括工程特性)已經(jīng)準(zhǔn)確定值,并附有定值的不確定度。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的特性有如下五大類:1、化學(xué)成分類:標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),純的化合物或是有代表性的基體樣品,天然的或添加(被)分析物的(如,用作農(nóng)藥殘留分析的添加了殺蟲劑的動(dòng)物脂肪),以一種或多種化學(xué)或物理化學(xué)特性值表征。2、生物和臨床特性類:與目錄A相似的標(biāo)準(zhǔn)
ELISA技術(shù)的七個(gè)*性2023/05/04
ELISA技術(shù)的*性:(一)靈敏度高雖然酶活性調(diào)節(jié)ELISA方法的靈敏度目前并不十分理想,但在酶活性放大ELISA中,檢測的靈敏度遠(yuǎn)比RIA高。根據(jù)質(zhì)量作用定律。即免疫反應(yīng)所形成的免疫復(fù)合物量與反應(yīng)物濃度成正比。推測所檢測的待測物分子數(shù)為1。已知1個(gè)摩爾濃度含6.02×1023個(gè)分子,那么理論推測酶活性放大Elisa方法的zui低檢測限可達(dá)1.7×10-24mol/L。雖然在實(shí)際應(yīng)用中由于反應(yīng)條件和試劑純度以及儀器精度等因素的影響,往往達(dá)不到這個(gè)水平(大于104個(gè)分子),但表明Elisa在靈敏度
細(xì)胞培養(yǎng)中的污染源是哪些?2023/04/23
細(xì)胞培養(yǎng)是指將細(xì)胞從動(dòng)物或植物體內(nèi)取出,然后在適宜的人工環(huán)境中生長的過程。細(xì)胞可以在培養(yǎng)前直接從組織中取出并通過酶或機(jī)械方法進(jìn)行解離,也可以來源于已建立的細(xì)胞系或細(xì)胞株。細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)是在細(xì)胞房中進(jìn)行,在超凈工作臺(tái)或生物安全柜中,把細(xì)胞處理好,根據(jù)需要加入細(xì)胞培養(yǎng)基,放入細(xì)胞培養(yǎng)瓶/皿或細(xì)胞培養(yǎng)板中,再放到帶有5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)過程中如果操作不當(dāng)或者條件控制不合適容易受到化學(xué)或者生物因素的污染,常見的污染源有:1.細(xì)菌污染細(xì)菌污染是實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染,即使在細(xì)胞培
顆粒酶K抗體的主要功能2023/04/20
抗體是一種被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì),是一種免疫球蛋白。它的產(chǎn)生是由于抗原侵入人體后引起各種免疫細(xì)胞相互作用,使淋巴細(xì)胞中的B細(xì)胞增殖分化而形成漿細(xì)胞(效應(yīng)B細(xì)胞),漿細(xì)胞可產(chǎn)生分泌抗體。抗體的主要功能:1、抗體能抑制病原體的生長繁殖,比如抗病菌的抗體就使入侵的病菌發(fā)生凝集,不讓病菌吸取營養(yǎng),饑餓的病菌就不能繁殖了。2、抗體能阻止病毒或病菌靠近人體細(xì)胞,入侵者不能靠近人體細(xì)胞,就不能黏附在細(xì)胞上,它就不能破壞人體細(xì)胞,不能形成感染。3、抗體可以中和病毒,比如乙
熒光定量PCR儀硬件設(shè)計(jì)特點(diǎn)2023/04/11
熒光定量PCR儀主要有傳統(tǒng)的96孔板式、創(chuàng)新的離心式等,每種設(shè)計(jì)都有它的獨(dú)到之處但也都有無法避免的缺憾。傳統(tǒng)的96孔板的熒光定量PCR可以容納的樣本量大,而且無需特殊的耗材。有些傳統(tǒng)的96孔板的儀器采用鹵鎢燈激發(fā)、CCD檢測,這些光學(xué)結(jié)構(gòu)在96孔板的頂部,每個(gè)樣品孔距光源和檢測器的光程各不相同——邊緣效應(yīng),對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響。為了保證精確、準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,這類儀器在實(shí)驗(yàn)過程中通常會(huì)使用ROX(一種熒光染料)或?qū)S玫腞eferencedye作為參照校正實(shí)驗(yàn)結(jié)果。鹵鎢燈的使用壽命短、更換成本較高已經(jīng)成為
小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞原代培養(yǎng)2023/03/20
小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞原代培養(yǎng):1、取約500mg脂肪組織(自外科手術(shù)患者的皮下獲取),再將脂肪組織一次擠壓進(jìn)入準(zhǔn)備好的15m離心管中,每個(gè)離心管中的組織不超過5ml。2、吸取緩沖液PBS7ml加入到上述裝有組織的離心管中,用吸管吹打10~20次,然后靜置1min左右,用吸管將組織下層的液體吸出。如此反復(fù)直到所吸出的液體呈透明狀,不帶有血細(xì)胞為止。3、向有的試管中加入與組織量相同大約5ml左右的消化液(yi酶0.25%,I型膠原酶0.1%以1:1比例混合配制而成),將試管密封,放入37°C恒溫
淺談抗體實(shí)驗(yàn)原理2023/03/13
抗體實(shí)驗(yàn)原理:1、特異性結(jié)合抗原:抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細(xì)胞,通常需要補(bǔ)體或吞噬細(xì)胞等共同發(fā)揮效應(yīng)以清除病原微生物或?qū)е虏±頁p傷。然而,抗體可通過與病毒或毒素的特異性結(jié)合,直接發(fā)揮中和病毒的作用。2、激活補(bǔ)體:IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通過經(jīng)典途徑激活補(bǔ)體,凝聚的IgA、IgG4和IgE可通過替代途徑激活補(bǔ)體。3、結(jié)合細(xì)胞:不同類別的免疫球蛋白,可結(jié)合不同種的細(xì)胞,參與免疫應(yīng)答。4、可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進(jìn)入胎兒血流中,使胎兒形成自然被
組織培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)有哪些2023/03/13
組織培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)與體內(nèi)細(xì)胞基本相同,但在大體形態(tài)以及某些細(xì)微結(jié)構(gòu)方面仍存在著一定的差異。根據(jù)細(xì)胞是否貼附于支持物上生長,形態(tài)有所不同。呈懸浮生長時(shí),不論細(xì)胞原來源于體內(nèi)何種類型細(xì)胞.由于生長在液體環(huán)境中,胞體基本呈圓形。大多數(shù)細(xì)胞是貼附型生長的。當(dāng)細(xì)胞貼附在支持物上后,細(xì)胞分化現(xiàn)象常變得不顯著,易失去它們?cè)隗w內(nèi)時(shí)的原有特征.在形態(tài)上表現(xiàn)單一化的現(xiàn)象。貼附于支持物表面后,開始仍為圓形,但為時(shí)很短,很快便經(jīng)過形態(tài)演變過渡成扁平形態(tài)。1.成纖維細(xì)胞型:此細(xì)胞形態(tài)與體內(nèi)成纖維細(xì)胞的相似而得名,胞體呈
選擇合適的血清簡要介紹2023/03/06
血清是細(xì)胞培養(yǎng)中唯yi外源添加的成分不確定的物質(zhì),血清的質(zhì)量對(duì)實(shí)驗(yàn)成敗起著關(guān)鍵性作用,但血清使用不當(dāng)也可能會(huì)導(dǎo)致血清質(zhì)量下降,造成細(xì)胞培養(yǎng)效果不理想。怎樣選擇合適的血清下面簡要介紹:目前市面上的血清產(chǎn)品五花八門,各種品牌宣稱來自各個(gè)血源地,讓人眼花繚亂。可以確定的是,除了所謂的“水貨",它們當(dāng)中絕大多數(shù)都是質(zhì)量合格的產(chǎn)品。但合格不一定好用,或者說適用于某一種細(xì)胞。要確定一款血清的性能,或者從眾多血清來源中挑選一款,唯yi的辦法就是篩選驗(yàn)證。血清的篩選驗(yàn)證主要包括:形態(tài)驗(yàn)證、增殖能力測試和克隆形成
PCR反應(yīng)被抑制或效率較低調(diào)整步驟2023/02/27
一旦確定反應(yīng)被抑制或效率較低,則可采取一些步驟將效率值重新調(diào)整到理想范圍內(nèi)。1、對(duì)于抑制作用,可去除模板濃度最高的反應(yīng)孔并重新分析標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果效率重新回到110%以下,則分析良好。2、另一種解決方案是重新純化模板。切記應(yīng)延長干燥時(shí)間,以去除乙醇沉淀過程中的乙醇,或采用另外的柱上洗滌液將離液鹽從硅膠純化物中去除。3、通過分析優(yōu)化可解決效率低下的問題。此過程有時(shí)相對(duì)簡單,但在某些情況下,隨著分析復(fù)雜度的提高,優(yōu)化過程可能十分耗時(shí)費(fèi)力。4、擴(kuò)增單個(gè)產(chǎn)物時(shí),將鎂的濃度提升至6mM可提高反應(yīng)效率,但當(dāng)出
RT-PCR反應(yīng)注意事項(xiàng)2023/02/20
逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)((ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction,RT-PCR)該技術(shù)主要用于:分析基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物、獲取目的基因、合成cDNA探針、構(gòu)建RNA高效轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)。反應(yīng)注意事項(xiàng):1.在實(shí)驗(yàn)過程中要防止RNA的降解,保持RNA的完整性。在總RNA的提取過程中,注意避免mRNA的斷裂。2.為了防止非特異性擴(kuò)增,必須設(shè)陰性對(duì)照。3.內(nèi)參的設(shè)定:主要為了用于靶RNA的定量。常用的內(nèi)參有G3PD(甘油醛-3-磷酸脫氫酶)、β-Actin(β-肌動(dòng)蛋白
熒光定量檢測試劑盒試驗(yàn)假陽性解決方法2023/02/14
一、引物設(shè)計(jì)不合適:選擇的擴(kuò)增序列與非目的擴(kuò)增序列有同源性,因而在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí),擴(kuò)增出的PCR產(chǎn)物為非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出現(xiàn)假陽性。需重新設(shè)計(jì)引物。二、靶序列或擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染:這種污染有兩種原因:一是整個(gè)基因組或大片段的交叉污染,導(dǎo)致假陽性。這種假陽性可用以下方法解決:1、操作時(shí)應(yīng)小心輕柔,防止將靶序列吸入加樣器內(nèi)或?yàn)R出離心管外。2、除了酶及其他不耐高溫的物質(zhì)外,所有試劑或器材均應(yīng)高壓消毒。所用離心管及進(jìn)樣槍頭均應(yīng)一次性使用。3、必要時(shí),在加標(biāo)本前,反應(yīng)管和試劑用紫
淺析各種血清功能用途2023/02/10
1、透析血清分子量小于10,000的分子如氨基酸、葡萄糖、鹽離子和未結(jié)合的蛋白均被移除。透析血清主要用在進(jìn)行營養(yǎng)成分優(yōu)化和標(biāo)定特定成分進(jìn)行研究的實(shí)驗(yàn)中。2、碳吸附血清使用活性和右旋糖苷去除血清中的親脂類(lipophilic)物質(zhì),如某些激素、細(xì)胞因子、生長因子等,去除作用對(duì)分子量大小并無區(qū)分。碳吸附胎牛血清常用于體外培養(yǎng)研究驗(yàn)證激素的作用效果。3、去外泌體血清適用于收集細(xì)胞分泌的外泌體時(shí)使用。4、低IgG血清用于研究抗體、病毒和病毒反應(yīng)、細(xì)胞表面抗原表位。5、四環(huán)素血清應(yīng)用于使用敏感四環(huán)素誘導(dǎo)
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