手机版av在线_96精品国产aⅴ在线观看_中文字幕35页_国产亚洲成AV人片在线观黄桃_全黄性色大片_免费视频h

熒光定量PCR儀選擇關(guān)注點匯總2024/08/26

選擇一款適合自己需求的熒光定量PCR儀時關(guān)注點:1、儀器的檢測通量在購買定量PCR儀的時候要根據(jù)實驗實的需要來選擇不同通量的儀器。目前市面上的熒光定量PCR的檢測通量小到16個多到384個。如果進行一般的基因表達研究或病原體檢測，實在不必購買昂貴的儀器，96孔的通量足夠用;需要尋找要新藥靶點和疾病標(biāo)記的實驗室可以考慮購買384孔板的儀器。假如經(jīng)費有限無法購買384孔板儀器的實驗室，可以考慮購買運行速度快(帶有FAST模塊)的96孔板熒光定量PCR儀。有了高通量的儀器，你會發(fā)現(xiàn)樣品的制備和小體系、

PCR反應(yīng)假陰性，不出現(xiàn)擴增條帶分析2024/08/19

PCR反應(yīng)常出現(xiàn)假陰性，不出現(xiàn)擴增條帶現(xiàn)象，PCR反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)有①模板核酸的制備，②引物的質(zhì)量與特異性，③酶的質(zhì)量，④PCR循環(huán)條件。尋找原因亦應(yīng)針對上述環(huán)節(jié)進行分析研究。模板：①模板中含有雜蛋白質(zhì)，②模板中含有Taq酶抑制劑，③模板中蛋白質(zhì)沒有消化除凈，特別是染色體中的組蛋白，④在提取制備模板時丟失過多，或吸入酚。⑤模板核酸變性不徹di。在酶和引物質(zhì)量好時，不出現(xiàn)擴增帶，極有可能是標(biāo)本的消化處理，模板核酸提取過程出了毛病，因而要配制有效而穩(wěn)定的消化處理液，其程序亦應(yīng)固定不宜隨意更改。酶失活：

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）操作步驟2024/08/05

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReaction，PCR）是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法，為常用的分子生物學(xué)技術(shù)之一。操作步驟：1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。10×PCRbuffer5μldNTPmix（2mM）4μl引物1（10pM）2μl引物2（10pM）2μlTaq酶（2U/μl）1μlDNA模板（50ng-1μg/μl）1μl加ddH2O至50μl視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置P

omentin大鼠網(wǎng)膜素ELISA試劑盒雙抗體夾心法操作步驟2024/07/30

omentin大鼠網(wǎng)膜素ELISA試劑盒雙抗體夾心法操作步驟：①：抗體包被在96孔板上包被抗體。由于酶標(biāo)板是由聚苯乙烯制成，其含有的苯環(huán)與抗體的氨基酸殘基具有類似π-π堆積作用的引力，結(jié)合靜電和疏水作用，可以將抗體吸附于其表面。然后，將未吸附的抗體用緩沖液清洗后，加入含有明膠或牛血清蛋白（BovineSerumAlbumin,BSA）的封閉液以封閉酶標(biāo)板上未結(jié)合抗體的部分。加入封閉液的目的，是防止其他蛋白因靜電或疏水作用吸附在96孔板上，造成假陽性信號，干擾后續(xù)實驗的進行。②：免疫識別在96孔板

PCR“平臺效應(yīng)”相關(guān)因素介紹2024/07/22

“平臺效應(yīng)”是指PCR后期循環(huán)產(chǎn)物累積趨于飽和，使原來以指數(shù)增長的速率變成平坦的曲線，同時出現(xiàn)非特異產(chǎn)物的大量增加的現(xiàn)象。下列因素可能與平臺效應(yīng)有關(guān)：（1）dNTP或引物的消耗量。（2）反應(yīng)物的穩(wěn)定度（dNTP或酶）（3）最終產(chǎn)物的阻化作用（焦磷酸鹽、雙鏈DNA）。（4）非特異產(chǎn)物或引物二聚體與反應(yīng)物的競爭。（5）產(chǎn)物在高濃度時變性不全，影響引物的延伸。（6）酶與PCR產(chǎn)物的結(jié)合，使酶分子減少。合理的PCR循環(huán)參數(shù)，能最大限度地避免這些因素對產(chǎn)物擴增的影響。

細胞收到處理流程2024/07/08

細胞收到處理流程：1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細

培養(yǎng)基（Medium）常見的滅菌方法2024/07/01

培養(yǎng)基（Medium）是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料，一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機鹽（包括微量元素）以及生長素和水等。在發(fā)酵過程中，培養(yǎng)基滅菌主要有以下幾個原因：如不滅菌，會使生物反應(yīng)的基質(zhì)或產(chǎn)物，因雜菌的消耗而損失，造成生產(chǎn)能力的下降;雜菌也會產(chǎn)生代謝產(chǎn)物，這就使產(chǎn)物的提取更加困難，造成得率降低，產(chǎn)品質(zhì)量下降;雜菌大量繁殖后，會改變反應(yīng)液的pH值，使反應(yīng)異常;有些雜菌會分解產(chǎn)物，使生產(chǎn)失敗;如果發(fā)生噬菌體污染，生產(chǎn)菌細胞將被裂解，使生產(chǎn)失敗。常見的滅菌方法：1、

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用途有哪些2024/06/24

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的幾個方面用途：1、用作校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)一是用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)檢定儀器的計量性能是否合格，如響應(yīng)曲線、精密度、靈敏度、檢測限與穩(wěn)定性等，可選用與儀器測量范圍相宜、量值成梯度的系列標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，從量值最小的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)開始，逐個測定。二是用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)做校準(zhǔn)曲線，為實際樣品建立定量關(guān)系，此時應(yīng)選擇與被測樣品基體相匹配的系列標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用與測定樣品相同的方法和測量條件，逐個測定。以上兩種情況的實驗設(shè)計和數(shù)據(jù)處理均基于最小二乘法線性回歸原理。2、用作工作標(biāo)準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)做測量工作標(biāo)準(zhǔn)，給物質(zhì)或材料賦值。應(yīng)選用一種基體與量值均

各種類血清不同點區(qū)別2024/06/18

血清（serum）是指在凝固后，將紅細胞、白細胞和血小板等細胞成分除去后所剩下的液體部分。它由水、蛋白質(zhì)、糖類、激素、酶、電解質(zhì)和其他生物分子組成。血清可以通過離心或其他方法從全血中分離出來，并可用于研究許多方面的生物學(xué)過程。1.血清分類：血清有以下常見四種類別，它們的胎齡：胎牛血清（FBS)胎兒(母牛懷孕3-8個月)新生牛血清(NCS)出生10日內(nèi)小牛血清（BCS）16-22周供體血清成年牛2.采血方式不同胎牛血清：母牛懷孕3-8個月時，采用剖腹心臟密閉穿刺取血新生牛血清、小牛血清、供體牛血清

血小板因子3(PF-3)ELISA試劑盒樣本處理及要求2024/06/12

血小板因子3(PF-3)ELISA試劑盒樣本處理及要求：1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、

凍存細胞收集處理過程2024/06/03

凍存細胞是通過冷凍保護機制將細胞放在低溫環(huán)境，減少細胞代謝，保持細胞活性，以便長期儲存的一種技術(shù)。細胞復(fù)蘇后，蛋白質(zhì)仍有活性，細胞的結(jié)構(gòu)和功能仍完好。下面收到凍存細胞收集處理過程：1、收到快遞后，若發(fā)現(xiàn)凍存管破損、箱內(nèi)已無干冰，請拍照后及時聯(lián)系供貨商。2、收到細胞后請盡快復(fù)蘇，給凍存管（外觀×1張）拍照留存，隔天在倒置顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，給細胞（100倍×2張，200倍×2張）拍照，售后時需提供。3、復(fù)蘇細胞時不可直接將凍存管丟進水浴鍋，用鑷子夾住凍存管頂部，將凍存管下部浸入水中即可，由于水浴

PCR產(chǎn)物純化效率提升要點匯總2024/05/27

PCR擴增完成后需要進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，在條帶單一無其他雜帶的情況下，可以直接對產(chǎn)物進行純化。提升PCR產(chǎn)物純化效率要點匯總?cè)缦拢?.模板純度，有較多蛋白或其他雜質(zhì)時，會一定程度影響pcr效率；2.模板量，過高的模板量反而會降低pcr效率特異性；3.引物，引物的長度xu要再效率和特異性間獲得優(yōu)化，其次要控制引物gc含量；4.聚合酶，要考慮酶的保真率和速度；5.mg離子濃度，mg離子濃度過高會降低特異性，濃度過低會降低效率；6.退火溫度：退火溫度低，效率會高，但特異性降低；退火溫度高，效率降低

二抗的選擇指導(dǎo)2024/05/20

二抗是在其它宿主體內(nèi)制備的能與一抗或一抗片段結(jié)合的抗體，上通常連有酶或熒光素等標(biāo)簽。由于二抗所具備的優(yōu)點使得其在免疫學(xué)實驗中得以廣泛應(yīng)用，如WB/ELISA/IHC/IP等。二抗針對某一特定物種的所有抗體均具有特異性，因而使用特定標(biāo)記的二抗可以免去對每一個一抗進行標(biāo)記，大大節(jié)省了時間和費用；此外，一個一抗分子可以同時結(jié)合幾個二抗分子，從而使信號大大增強，提高了實驗靈敏度。二抗，廣義上是指專門和一抗進行特異性反應(yīng)和結(jié)合的抗體。檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，在選擇二抗的時候要綜合考慮一

細胞計數(shù)實驗步驟2024/05/13

細胞計數(shù)實驗原理：當(dāng)待測細胞懸液中細胞均勻分布時，通過測定一定體積懸液中的細胞的數(shù)目，即可換算出每毫升細胞懸液中細胞的細胞數(shù)目。實驗步驟：一.準(zhǔn)備工作：取一瓶傳代的細胞，按照《傳代細胞培養(yǎng)（消化法）》中的傳代方法繁殖細胞，待長成單層后以被使用。二.細胞懸液制備：細胞懸液的制備方法是用0.25％的yi蛋白酶液消化、PBS液洗滌后，加入培養(yǎng)液（或Hanks液或PBS等平衡鹽溶yi），吹打制成待測細胞懸液。三.細胞計數(shù)：1.蓋好蓋玻片：取一套血球計數(shù)板，將特制的蓋玻片蓋在血球計數(shù)槽上。2.制備計數(shù)用的

ELISA試劑盒結(jié)果處理報告2024/05/06

ELISA試劑盒結(jié)果處理報告：1、結(jié)果的判定嚴格依據(jù)試劑盒提供的陽性判定值（CO）進行結(jié)果判定。提供試劑的同時，說明書上列出的CO值是建立在一系列科學(xué)試驗及統(tǒng)計研究的基礎(chǔ)上，不應(yīng)隨意更改。定量測定需要制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算結(jié)果。2、灰區(qū)的設(shè)置通常情況下ELISA結(jié)果報告方式為“陰性"或“陽性"，在二者之間有一條明確的分界線，也就是所謂的陽性判定值即CO值，對于樣本的吸光度值（A）高于CO值就判斷為陽性，相反則判斷為陰性，然而在實際工作中經(jīng)常會出現(xiàn)樣本A值位于CO值附近的人群，即ELISA

選擇適合實驗需要的抗體要點2024/04/28

選擇適合實驗需要的抗體要點：1.一抗選擇要點（1）確定抗體的名字，注意中英文名字、它名、亞型等信息。（2）確定你的實驗類型，Elisa，WB，IHC，ICC，還是FACS。一般抗體的說明書都會列出該抗體經(jīng)驗證過適用于何種實驗的類型，如果抗體說明書沒有提及的應(yīng)用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型，而僅是說明尚未經(jīng)過此種實驗驗證，請根據(jù)說明書列出的已驗證的類型來選擇適合你實驗的抗體。（3）確定實驗樣本的種屬，Human，Mouse，還是Rat。一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗驗證過適用于

分享ELISA實驗檢測方法的優(yōu)點和缺點2024/04/22

ELISA實驗有四種常用的檢測方法，分別是直接法、間接法、雙抗體夾心法和競爭法。現(xiàn)分享下它們的優(yōu)點和缺點。1.直接法（directELISA）將抗原直接固定在固相載體上，加入酶標(biāo)記的一級抗體，即可測定抗原總量，此一級抗體的特異性非常重要。優(yōu)勢：操作手續(xù)簡短，因無須使用二抗可避免交互反應(yīng)。缺點：試驗中的一抗都得用酶標(biāo)記，但不是每種抗體都適合做標(biāo)記，費用相對提高。2.間接法（indirectELISA）此測定方法與直接法類似，差別在于一級抗體沒有酶標(biāo)記，改用酶標(biāo)記的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量

血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有什么2024/04/15

血清的種類：現(xiàn)常用血清主要是牛血清、人血清、馬血清等。其中牛血清來源充足、制備技術(shù)成熟、經(jīng)過長時間的應(yīng)用考驗人們對其有比較深入的理解，故而是常用的血清。牛血清有小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清是品質(zhì)高的，因為胎牛還未接觸外界，血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分最少。血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):1.內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)為不高于5EU/ml。2.總蛋白含量胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml，數(shù)值偏高偏低都會影響實驗的正常進行。3.血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl。4.pH。國產(chǎn)血清、大多高于7.5，進口

基質(zhì)金屬蛋白酶-16抗體制備過程2024/04/08

基質(zhì)金屬蛋白酶-16抗體制備過程：1.免疫原：普通的大分子蛋白，通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導(dǎo)表達獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原；小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。2.免疫動物：常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。3.免疫血清的收集：一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜

H9細胞消化液操作說明2024/03/29

操作說明：1.將H9全培養(yǎng)基取出并平衡至室溫，取出包被過Matrix的培養(yǎng)皿/瓶，吸去包被液并加入適量全培養(yǎng)基，置于5%CO2的37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中。2.吸走待傳代細胞培養(yǎng)皿/瓶中的iPS全培養(yǎng)基，并且加入無鈣鎂的PBS溶液洗一次。3.加入0.5mMEDTA傳代工作液使之全覆蓋皿/瓶底。4.室溫放置5~8min或37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中孵育3~5min，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開始脫離皿/瓶底，克隆內(nèi)部大部分細胞間出現(xiàn)間隙但尚未相互分離，肉眼觀察到細胞集落變得不透明且發(fā)白，表明細胞消化時間理